文│云南万绿生物股份有限公司 刘娅

芦荟是一种含有较为丰富的营养物质的天然植物，其生物活性成份复杂多样，主要含有多糖、芦荟苷、氨基酸、有机酸、维生素等多种营养成分。芦荟多糖是一类具有不同生理功能的多糖大分子化合物，主要由甘露糖、半乳糖、葡萄糖等组成，以甘露糖为主，在凝胶干物质中占5%以上。多糖是芦荟中的主要成分，具有抗感染、抗癌、保肝、增强免疫力等功效，已广泛应用于食品、保健食品、化妆品、医药品等领域。芦荟多糖是芦荟制品的主要特征之一，产品中芦荟多糖含量在一定范围内越高，则产品质量越好，反之则质量越差。另外也说明其加工工艺不合理，需近一步改进。芦荟多糖含量与芦荟品种、生长环境及生长期等因素有关。芦荟多糖含量的检测方法也是近年来探索芦荟功能性指标的热点之一。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

本实验所用化学试剂均为分析纯，所用水均为蒸馏水或去离子水。

库拉索芦荟、可见紫外分光光度计（UV759）、分析天平、电子万用炉、离心机、电子恒温干燥箱、移液管、容量瓶、烧杯。

95%乙醇、葡萄糖（分析纯）、苯酚、铝片、碳酸氢钠、浓硫酸。

1.2 葡萄糖标准液制备：精确称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，置100mL容量瓶中，加水溶解至刻度（可加几滴甲苯或几粒苯甲酸防腐）。此标准溶液1.00mL含葡萄糖1.00mg。

1.3 苯酚液制备：取苯酚100g，加铝片0.1g，碳酸氢钠0.05g，蒸馏收集182℃馏分，称取此馏分10.0g，加水150g，置棕色瓶中备用。

2 实验方法

2.1 库拉索芦荟凝胶脱色汁制备方法：芦荟鲜叶→清洗→去皮→打浆均质→降解→脱色→过滤制得芦荟凝胶脱色汁。

2.2 库拉索芦荟全叶汁制备方法：芦荟鲜叶→清洗→打浆均质→降解→过滤制得芦荟全叶汁。

2.3 芦荟多糖测定方法，参照QB/T2489的方法。

2.3.1 测定方法及步骤

2.3.1.1 测定原理

选用95%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰成分，然后用去离子水提取其中所含的多糖类成分。多糖在硫酸的作用下，水解生成戊糖、己糖和糖醛酸等单糖，并迅速脱水水解生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，在490nm处有吸收峰，吸收值与糖含量呈线性关系，用分光光度计测定。

2.3.1.2 标准曲线的制备

吸取葡萄糖标准液0.25，0.5，1.00，2.00，2.50mL，分别置于50mL容量瓶中，加水定容。吸取上述溶液各2.00mL，再加苯酚液1.00mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.00mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温，于490nm处以水作参比测吸光度，绘制标准曲线，并求得回归方程如下：

2.3.1.3 芦荟待测样品预处理

液体样品：将样品混匀后备用。

固体样品：称取1.0000g样品粉末，加1.5mL甲醇润湿，加60℃热水超声波萃取30分钟后，至样品完全溶解，用去离子水定容至100mL，摇匀，备用。

准确吸取样品液10mL加入9倍体积的95%乙醇在4℃下静止沉淀12小时（放置过夜），以4000r/min旋转速度离心20分钟，弃去上清液，将沉淀物用（60±2℃）的热水50mL充分溶解，并用10mL（60±2℃）热水洗涤离心管三次，洗液并入容量瓶，放冷后定容至刻度，备用。

2.3.1.4 样品中多糖含量测定

吸取（3）制备的样品液2.00mL，置于10mL容量瓶中，加水定容。吸取2.00mL上述溶液，再加苯酚液1.00mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.00mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温，于490nm处以去离子水作参比测吸光度。另以2.00mL水，同上操作做空白。查标准曲线得样品液中葡萄糖含量（μg/mL）

2.3.1.4 结果分析计算

固体样品X（mg/100g）＝〔（c1-c2）×D×V5× V0×100〕/ （V4× G×1000）＝〔（c1-c2）×D×V5× V0〕/ （V4× G×10）

液体样品X（mg/100mL）＝〔（c1-c2）×D×V5×100〕/（V4×1000）＝〔（c1-c2）×D×V5〕/（V4×10）

式中：x－样品中多糖含量（以葡萄糖计），mg/100g或mg/100mL

c1－从浓度＿吸光度曲线上查得样品溶液的葡萄糖浓度，μg/mL

c2－从浓度-吸光度曲线上查得空白溶液的葡萄糖浓度，μg／mL

V0-为固体样品处理时所定容的体积，mL，如本法为100

V4－乙醇沉淀时所移样品的体积，mL，如本法为10

V5－待测样品多糖溶液定容体积，mL，如按本方法为100

G－称取固体样品的质量，g

D－稀释倍数，如按本方法为5

2.3.2 平行测定两次，如果其结果符合允许差时，取两次测定结果的算术平均值作为结果，报告结果取三位有效数字。

3 稳定性、重现性实验

为了评价所用方法的稳定性及重现性，按操作方法对样品库拉索芦荟凝胶脱色汁及全叶汁处理后，重复比色6次，测定吸光度，计算其多糖含量，结果如下表格：

从实验结果来看，此种方法的RSD小于1%，测量的误差都较小，精密度也好，因此，用分光光度法测定芦荟中多糖含量是比较可行的，具有一定的实际意义。

4 结果与讨论

制备苯酚液时，弃去开始几滴及最后的蒸馏液，苯酚液浓度影响多糖显色。所用的分析纯或优级纯硫酸，应无黑色残渣及异物，否则影响测定结果。滴加浓硫酸时应小心沿比色管内壁慢慢滴加，防止反应过激烈伤害到自己及他人。样品滴加硫酸及苯酚后都应充分摇匀，使其反应充分，其反应正常颜色呈橘黄色。为使误差在允许范围内，一般要求其吸光度在0.2～0.8之间最适宜，这样尽可能减少误差。

该方法不仅操作简单、快速省时、准确度较高、结果重现性好，可广泛用来测定芦荟制品中多糖含量。

样品编号 空白溶液吸光度样品溶液吸光度样品多糖含量（mg/100g） 平均值 标准偏差（SD）相对标准偏差（RSD）凝胶脱色汁1 0.012 0.339 94.67 95.30 0.54 0.0056凝胶脱色汁2 0.343 95.82凝胶脱色汁3 0.341 95.25凝胶脱色汁4 0.339 94.67凝胶脱色汁5 0.341 95.26凝胶脱色汁6 0.344 96.11全叶汁1 0.013 0.472 132.88 132.69 0.79 0.0060全叶汁2 0.469 132.01全叶汁3 0.475 133.75全叶汁4 0.471 132.59全叶汁5 0.467 131.43全叶汁6 0.474 133.46