潘德锋 佘菊香 胡春艳

环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。因其无需特殊设备，且具有PCR类似的灵敏度和特异性，目前日益受到临床重视[1]。肺炎嗜衣原体（Chlamydophila pneumoniae,Cpn）是一种能引起非典型性肺炎的严格细胞内寄生的病原体，能导致10%小儿社区获得性肺炎[2-3]。由于Cpn分离培养困难，临床误诊较多。本研究通过对比LAMP和最常用的酶联免疫吸附试验（ELISA）在检测小儿Cpn下呼吸道感染情况，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究所纳入的研究对象为2010年1月～2012年1月我科收治的80例下呼吸道感染患儿，其中，男性患儿42例，女性患儿38例。年龄2.5～8.5岁，平均年龄（5±0.5）岁。所有患儿均有不同程度的呼吸道感染临床症状，并排除其他肺外感染性疾病。

1.2 Cpn IgM抗体检测 入院当日空腹抽取静脉血2mL，抗凝后于1000r离心10min，取200μ L血清用于IgM抗体检测。方法按照德国EuroImmun ELISA试剂盒提供的操作进行。根据酶标仪测定的最OD值（λ=450nm）计算IgM的滴度。

1.3 LAMP实验 根据GenBank提供的Cpn基因序列设计两条外引物、两条内引物和两条环结合引物（因涉及专利问题，序列无法列出）。反应体系包括1μL上述3种引物，1.5μL 20×buffer，2.5μLMgCl2，1.25μLdNTP（10mmol/L），5μ L 5×Betaine，Bst多聚酶0.5μL，模板0.5μL，RNA酶0.5μL。反应条件为65℃ 45min，结束后用2%琼脂糖凝胶电泳，若出现LAMP特征性梯状条带者为阳性。

1.4 统计学方法 应用SPSS 13.0软件对数据进行统计学处理，计数资料组间比较采用χ2检验。检验水准：α=0.05，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 患儿下呼吸道Cpn检出情况 80例患儿分别采用ELISA和LAMP法对Cpn IgM或DNA进行检测，从表1可以看出，ELISA法可检测出47例阳性，阳性率为58.8%，而LAMP法Cpn阳性患者为57例，阳性率为71.3%，经统计学分析，P＞0.05。……