邓 宇，蔺 涛，孙春清，张宏彪，张 荣，龙进学，黄 律，文心田，曹三杰，童光志，袁世山，郑 浩＊

（1.四川农业大学动物医学院，四川 雅安 625014；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241；3.西昌学院动物科学学院，四川 西昌 615000；4.南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095）

牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）是单股正链RNA病毒，属于黄病毒科（Flaviridea）瘟病毒属（Pestivirus）成员，当前被分为2个种，BVDV－1和 BVDV－2[1]。BVDV 基因组全长约为12.3kb～12.5kb，由一个大的开放阅读框（open reading frame，ORF）和5′与3′非翻译区（untranslated region，UTR）所组成。该病毒ORF编码约4000个氨基酸残基组成的多聚蛋白，在病毒非结构蛋白与宿主细胞信号肽酶作用下，加工成BVDV结构蛋白和非结构蛋白，依次为p20（Npro）、C，gp48（Erns）、gp25（E1）、gp53（E2）、p7、p125（NS2－3（NS2，NS3））、p10 （NS4A）、p30 （NS4B）、p58（NS5A）、p75（NS5B）[2－3]。其中，E2（gp53）是 BVDVs亚型分类的依据之一，也是主要保护性抗原[4－5]。BVDV除引起牛感染外，还能引起野生反刍动物、兔、绵羊、山羊、猪等动物感染。猪感染BVDV会出现类似猪瘟的临床症状与病理变化[6]，给养猪业带来危害。近3年来，流行病学调查结果表明，我国猪群中BVDV感染已经比较严重，送检的样品中，部分批次样品阳性率高达80.72%[7－9]。近4年来，我们实验室对来自我国11省份的猪病料样品进行BVDV检测，结果也发现，部分猪场BVDV感染很严重，高达79.3%。我们从这些阳性病料中分离鉴定出一株BVDV SD0803，基于此，我们根据此毒株E2基因表达蛋白免疫兔制备多克隆抗体，为猪源BVDV快速诊断提供一种参考方法，为猪源BVDV病原学研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 毒株、细胞、实验动物 猪源BVDV SD0803株由本实验室分离鉴定；BVDV NADL标准毒株，购自中国兽医药监察所；MDBK细胞，购自美国ATCC，经本实验室建立的Nested－PCR与直接免疫荧光（Direct FA）检测均为BVDV阴性；……