徐建兰

合欢花 Albizia julibrissin Durazz.为常用中药，具有解郁安神之功效，用于治疗心神不安、忧郁失眠。2005年版《中国药典(一部)》合欢花项下收载合欢花药用部位仅为干燥的花序[1]，但根据多批样品收集情况和各地区实际使用情况调查，合欢的干燥花蕾在全国多个省份也被作为合欢花使用，习称为“合欢米”，《中华本草》《中药大辞典》《全国中草药汇编》中合欢花药用部位均为花序或花蕾。合欢花主要含有黄酮类成分，且以槲皮苷的含量较高，槲皮苷具有止血、抗毛细血管脆性及抗病毒等作用，药理活性明显[2－3]。笔者采用高效液相色谱法，测定了合欢花和合欢米中槲皮苷的含量，通过比较两者主要成分槲皮苷的含量差异，欲从有效成分的角度说明其两个药用部位(花序或花蕾)均作为合欢花使用有一定的合理性，目前尚无相关报道。

1 仪器与试药

HP1100型液相色谱仪(包括G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1322A脱气机，G1314A紫外可见检测器，G1316A柱温箱，HP化学工作站);岛津UV－260型紫外可见分光光度计。合欢花15批(编号01－15)，购于各地中药饮片厂或药店，由浙江省食品药品检验所郭增喜老师鉴定;槲皮苷对照品(批号为11538－200302，供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供);乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent Extend－C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流动相:乙腈 －0.1% 磷酸溶液(25 ∶75);流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:256 nm;进样量:5μL。在上述色谱条件下测定，结果表明，理论板数按槲皮苷峰计应不低于3 000，见图1。

2.2 溶液制备

图1 高效液相色谱图

取本品粉末(过三号筛)约0.25 g，同时另取本品粉末测定水分[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅨH第一法]，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL，称定质量，加热回流30 min，放至室温，再称定质量，用50%乙醇补足损失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24 h的槲皮苷对照品适量，精密称定，加50%乙醇制成每1 mL中含60μg的溶液，即得对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:分别精密量取槲皮苷对照品溶液(57.6μg/mL)1，3，8，13，20，25 μL 注入液相色谱仪，以峰面积(Y)为纵坐标、槲皮苷进样量(X)为横坐标，得回归方程 Y=2.764 12X－4.524 28，r=1.000 0(n=6)。结 果 表 明 ，槲 皮 苷 进 样 量 在 0.057 6 ～1.440μg范围内与峰面积有良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液5μL，按以上色谱条件，分别重复进样6次。测定峰面积。结果的 RSD为0.2%，表明仪器精密度良好。

重复性试验:精密称取同一合欢花药材6份，依法制备供试品溶液，精密吸取对照品溶液5μL，测定峰面积并计算槲皮苷含量。结果槲皮苷的平均含量为 8.5 mg/g，RSD=0.9%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:精密吸取供试品溶液，按拟订的色谱条件，分别于 0，4，7，15，21，27 h 时进样，测定槲皮苷的含量。结果的 RSD 为0.4%，表明供试品溶液在27 h内稳定。

加样回收试验:称取已知含量的同一批样品0.125 g，精密称定，精密加入一定量的槲皮苷对照品，按供试品溶液制备项下的方法操作，平行操作9份溶液，按拟订的色谱条件测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 槲皮苷加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

按上述测定方法对15批合欢花样品进行测定，并以外标一点法分别计算槲皮苷的含量(以干燥品计)。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=15)

3 讨论

供试品溶液制备中，笔者考察了回流、超声两种提取方法，结果表明采用回流提取效率较高。此外，通过对溶剂种类(甲醇、乙醇、50%乙醇)、超声时间、溶剂用量等因素进行考察，最后确定以25 mL 50%乙醇回流提取30 min为宜，该方法操作简便易行。

本试验中，曾结合槲皮苷的化学性质，比较了甲醇－磷酸溶液和乙腈－磷酸2种流动相，通过试验发现乙腈－磷酸溶液作为流动相进行梯度洗脱分离度较好;同时比较了0.05%磷酸、0.1%磷酸、0.2%磷酸3种缓冲液，不同酸度对3者的含量影响未见显著性差异;比较了Ultimate XB－C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，Kromasil KR100－5 C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Agilent Zorbax SB－C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)和 Agilent Extend－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)4种色谱柱，调整流动相比例后均能良好分离槲皮苷，且对其含量影响未见显著性差异。

为了选择合适的检测波长，曾采用岛津UV－260型紫外可见分光光度计对槲皮苷对照品溶液进行了扫描，其在256 nm和355 nm波长处有2个最大吸收峰，综合考虑检测灵敏度和样品中杂质的干扰情况，为使峰面积适宜，且杂质干扰较少，故最终选择256 nm为检测波长。

从测定结果看，合欢花中槲皮苷的含量范围为0.3%～2.4%，平均含量为1.4%。合欢米中槲皮苷的含量范围为0.3% ～1.9%，平均含量为1.4%。由此可见，合欢花和合欢米中槲皮苷的含量非常接近。此外，笔者比较了两者的薄层色谱图，图谱非常相似，这说明了其两个药用部位花序或花蕾都作为合欢花使用有一定的合理性。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:218.

[2]李作平，郜 嵩，郝存书.合欢花化学成分的研究[J].中国中药杂志，2000，25(2):103 －104.

[3]俞建平，马临科，郑建宝.HPLC测定合欢花中槲皮苷的含量[J].中国现代应用药学，2008，25(6):539 －540.