邓绪芳，史子学，魏建超，邵东华，王少辉，李蓓蓓，马志永

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241）

日本脑炎又称流行性乙型脑炎，是由日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）引起的一种严重损害中枢神经系统的人畜共患传染病，可引起人的致死性脑炎，重症患者康复后有严重的神经系统后遗症。该病主要流行于东南亚，在中国除青海和新疆外，其他省均有流行。自使用弱毒疫苗免疫预防后，中国该病的发病率显著降低，得到了很好的控制[1]，但每年仍有一定数量的发病病例。据世界卫生组织（WHO）估计，目前全球每年报告的发病人数在5万例左右，其中约1/3的病例死亡，存活者20%～40%留有神经麻痹和心理改变等严重后遗症[2]。因此，开发治疗性的抗病毒的药物显得尤为重要[3]。

JEV基因组全长10 976个核苷酸，除5'端95个核苷酸和3'端585个核苷酸为非编码区外，其余10 296个核苷酸形成一个开放阅读框（open reading frame, ORF），编码一个3432个氨基酸的多蛋白前体，经过酶切形成3个结构蛋白（C、prM和E）和 7个非结构蛋白（NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5）[1]。NS3是黄病毒科中最保守的非结构蛋白，至少具有3种酶活性，参与了病毒蛋白的水解加工以及病毒的复制，是病毒复制的必需蛋白。NS3蛋白已成为研究抗该病毒药物的重要靶标分子[4]。在本研究中，我们克隆了NS3基因C端，在大肠杆菌中获得高效表达，并制备了抗NS3的多克隆抗体，利用该抗体观察了NS3在神经细胞中的亚细胞定位，为进一步研究JEV的致病机制提供有价值的数据。

1 材料与方法

1.1 材料 JEV为本研究室的猪源分离株（病毒滴度为4×108PFU/mL）；……