马涛 肖品 聂磊

(青海大学医学院药学系，青海西宁810001)

藏药“叶蒙”，为毛茛科铁线莲属植物，其花白色的在青藏高原上只有短尾铁线莲Clematis brevicaudata DC.比较符合藏文献的描述〔1〕，《宇妥本草》中“敛黄水”的功效与现代医学的抗炎、镇痛相一致。本着开发藏药的目的，本文用抗炎镇痛的药效学方法进行实验研究同时确定其有效部位，收到满意的效果，现报道如下。

1 薄层色谱

1.2 实验方法

1.2.1 供试品溶液的制备:对照药材与实验用药材分别粉碎(过80目筛)、用石油醚脱脂，滤渣用95%乙醇加热回流3次，合并后趁热过滤，滤液减压回收乙醇，滤渣用少量乙醇溶解，作为薄层色谱分析的点样溶液。

1.2.2 对照品溶液的制备:取齐墩果酸的对照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。

1.2.3 对照药材品溶液的制备:取短尾铁线莲的对照药材加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照药材溶液。

1.2.4 薄层层析条件选择:硅胶G板(青岛海洋化工分厂，规格50×100);展开剂:三氯甲烷－甲醇－水(13:7:2)的上层溶液，三氯甲烷－丙酮－乙酸(12:3:0.7)的上层溶液;显色剂:10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰〔2〕。

1.2.5 操作:硅胶G板:从左到右点样，用相应的展开剂分别展开，显色剂显色。

注:左图中，从左往右点样依次是齐墩果酸对照溶液、齐墩果酸粗提物溶液、短尾铁线莲的对照药材溶液、实验用药材溶液;右图中，从左往右点样依次是齐墩果酸对照溶液、齐墩果酸粗提物溶液。黑色斑点表示齐墩果酸。

1.3 实验结果

用三氯甲烷－甲醇－水(13:7:2)展开剂展开的齐墩果酸对照品、药材对照品、供试品和齐墩果酸粗提品，斑点清晰，无拖尾现象，在紫外灯(365nm)下，对照药材斑点、供试品斑点、粗提品斑点在与对照品斑点相同的位置上，并显出紫蓝色，其Rf均为0.54。初步鉴定结果是:短尾铁线莲中含有齐墩果酸。

②严格执行医院相关规定,且定期对护理人员进行培训,继而让其完全掌握无菌操作理念,且进一步增强技能水平,养成严谨的态度、高度的责任心,继而起到避免医院感染事件的发生。

2 抗炎实验

2.1 仪器、试剂与动物

2.1.1 仪器:RE－52A旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂);SHZ－III型循环水真空泵 (上海亚荣生化仪器厂);DL－360E智能超声波清洗器 (上海之信仪器有限公司);HH－4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);TD电子天平(余姚市金诺天平仪器有限公司);一次性无菌注射器(1mL)(江西金山医疗器械有限责任公司);一次性无菌注射器(10mL)(陕西省华秦医疗器械厂)。

2.1.2 试剂与动物:短尾铁线莲醇溶物混悬液、齐墩果酸粗提物混悬液(由青海大学医学院中药实验室制作提供)、新鲜鸡蛋1个、生理盐水、乙酰水杨酸(吉林省三精医药有限责任公司，批准文号:国药准字H22022732);无水乙醇、三氯甲烷、吐温80、浓盐酸均为分析纯;SD大鼠(由青海省地方病防治所提供，动物证号:青医动管:001号)

2.2 实验用短尾铁线莲成分提取:以95%乙醇为溶剂供试液的制备工艺 称取短尾铁线莲400.00g用3924mL95%乙醇超声提取2h，过滤得到乙醇提取液，对药渣进行二次超声提取，将所得乙醇提取液与前者混合，于60℃水浴锅加热一个夜晚，得到烯醇提取液。用旋转蒸发仪50℃回流，回收乙醇，得浸膏。用三氯甲烷:乙醇=14:6的混合液作为萃取剂，对浸膏进行萃取，得到乙醇提取液、三氯甲烷提取液和残渣(舍弃)。对三氯甲烷提取液在微热条件下边搅拌边加热至45℃，静置一个夜晚，加蒸馏水至1:1，加热蒸发除去三氯甲烷，与齐墩果酸粗提物分别用95%乙醇溶解，再加热蒸发，留出部分样品备用，将剩余部分加蒸馏水至1:1，加1mL“吐温80”制得混悬液。

2.3 致炎剂制备:将新鲜鸡蛋清与蒸馏水按1:9混合制得致炎剂。

2.4 动物分组及给药:取40只SD大鼠随机分为A、B、C、D、E5组，分别为阴性对照组、乙酰水杨酸阳性对照组、齐墩果酸粗提取物溶液液LD50的1/3给药量组、乙醇提取液LD50的1/5给药量组、乙醇提取液LD50的1/3给药量组。对每组大鼠编号、称重、测量右后脚踝周长、计算给药量。在给药1/2h后，对每只大鼠注射致炎剂。此后，每间隔15min测量同一部位的周长〔3〕。

2.5 实验数据:实验数据见表1。

表1 SD大鼠右后脚踝周长变化数值(cm)

2.5 实验结果:由数据可知，短尾铁线莲乙醇提取液对抗脚踝肿胀效果强于复方乙酰水杨酸的抗炎作用，同时也比齐墩果酸的抗炎效果好;同一部位提取液不同的给药剂量在抗炎效果中也起不同作用。

3 高效液相法

3.1 仪器与材料:高效液相色谱仪(日本岛津)，LC－10AT泵，ZA－100进样器，N2000工作站，SPD－10A检测器，SY1200T超声波清洗器，ZF－1型三用紫外分析仪。齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110773－200811)，试剂除乙腈为色谱纯外，其他均为分析纯，水为重蒸馏水。

3.2 方法

3.2.1 色谱条件:色谱柱:HYPERSIL(C18200mmx4.6mm，5μm)，流动相:乙腈 －0.5% 冰乙酸(85:20)，流速:0.8mL，检测波长210nm，温度:室温。

3.2.2 对照品溶液的制备:精密称取齐墩果酸对照品10.08mg，加甲醇定容至50mL，精密吸取5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液作为对照品溶液。

3.2.3 齐墩果酸粗提物溶液的制备:取齐墩果酸粗提物，加甲醇定容至50mL，精密吸取5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液齐墩果酸粗提物作为溶液。

3.2.4 供试品溶液的制备:取原药短尾铁线莲，研细，精密称取，置小烧杯中，加入适量甲醇超声提取30min，过滤，置25mL容量瓶中，定容后摇匀，作为供试品溶液〔4〕。

3.2.5 标准曲线的绘制:精密吸取齐墩果酸对照品溶液2、4、10、16、20μL 依次进样，测定峰面积，以进样量为横坐标(X)，以色谱峰的峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归线方程:y=227323.17x－193813.14，相关系数 r=0.9978。表明齐墩果酸在0.2～2.0μg范围内线性关系良好。

3.3 结果:经结果对比可知:供试品与齐墩果酸对照品在相同时间点出峰，说明可以采用高效液相色谱法鉴别出短尾铁线莲中齐墩果酸的存在。

4 讨论

短尾铁线莲是独具高原特色的常用藏药之一。藏医认为短尾铁线莲有“提升胃温;破穿肿瘤，托脓”的作用。《形态比喻》记载说，“铁线莲为治寒性肿瘤良药，味辛、微甘，功效提升胃温，治肿瘤，引黄水。”中医称该属黄花铁线莲为铁线透骨草，具有祛风湿、止痹痛的功能，铁线莲属药物威灵仙具有祛风除湿，通络止痛，消痰水，散癖积的作用。威灵仙所含成分与短尾铁线莲相同，应与短尾铁线莲具有相同作用。相关文献报道证明，木犀科植物齐墩果的叶、女贞果实、龙胆科植物青叶胆全草、伞形科植物大星芹的叶、根中含有相对丰富的齐墩果酸，具有抗炎、镇痛作用〔5〕。本实验表明，短尾铁线莲中主要成分是齐墩果酸，实验结果表明，在对抗SD大鼠足肿胀试验中，P＜0.01，具有统计学差异，这与藏医学中相关医学的文献记录相一致。作为毛茛科的药用植物，短尾铁线莲分布广泛、储存量大，是独具高原特色的藏药之一，具有良好的开发利用价值。

〔1〕中国科学院西北高原生物研究所.藏药志〔M〕.西宁:青海人民出版社，1991.248.

〔2〕罗海燕，余葱葱，毛羽.薄层扫描法测定亮舒片中齐墩果酸的含量〔A〕.海口:中国热带医学，2007，07(3):1087～1089.

〔3〕吴论，梅全喜，钟希文，等.浓薄荷水对鸡蛋清致大鼠足趾肿胀影响的实验研究〔R〕.当代医学，2010，21(2):2.

〔4〕李梦.HPLC法测定女贞子中齐墩果酸的含量〔A〕.合肥:安徽农业科学，2008，10525～10526.

〔5〕中国医学科学院药物研究所.中药志(第一册)〔M〕.人民卫生出版社，1979.201.

〔6〕戴岳等.齐墩果酸的抗炎作用〔J〕.北京:中国药理学与毒理学杂志，1989，3(2):96.