李 正，程相朝，张春杰，李银聚，李 静，张明亮，田芳华，杨宁宁

(河南科技大学动物科技学院，河南 洛阳 471003)

鼠伤寒沙门氏菌(Salminella typhimurium)是一种肠道致病菌，对养禽业危害严重，常因伴发或继发感染其它疾病或治疗不及时而发生大批死亡，给养禽业造成重大损失，同时又是重要的人类食物源性病原体。由于抗菌药物的广泛应用，该类菌株耐药性日趋严重以及基于食品安全的考虑，免疫预防S.typhimurium疾病更为重要，但目前仍没有能够很好控制S.typhimurium病的活疫苗，而常规灭活疫苗不能产生很好的免疫力以抵御野毒的感染[1-2]。

通过基因工程方法减毒的沙门氏菌对人和动物的致病力显著降低，但仍然保持良好的感染性和免疫原性[3]。目前已有多个毒力相关基因被鉴定，并在此基础上构建了一系列毒力基因突变的减毒沙门氏菌株。编码环化腺苷酸合成酶的cya和编码环化腺苷酸受体蛋白的crp作为沙门氏菌的毒力调节基因研究已很深入，而国内尚未见构建S.typhimurium crp/cya基因双缺失株的报道，均为国外引进此类菌株作为载体或疫苗进行研究。本实验室已经构建 S.typhimuriumSL1344△cya基因缺失突变株，但其免疫原性还未得到证实，为探索更加安全和免疫原性良好的减毒株，本研究在SL1344△cya的基础上，以crp基因作为减毒基因，采用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术构建S.typhimurium SL1344△crp△cya双基因缺失突变株，研究其生物学特性，进而为开发更加安全有效的S.typhimurium弱毒疫苗奠定基础。

1 材料和方法

1.1 菌株、质粒和培养条件 S.typhimurium SL1344由南京农业大学馈赠；……