常晓飞，赵双成，田 石，柳金雄，王靖飞，曾显营，胡永浩，姜永萍*，陈化兰*

(1.甘肃农业大学动物医学院，甘肃 兰州 730007；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江 哈尔滨 150001；3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与技术服务中心，黑龙江 哈尔滨 150001)

禽流感(Avian influenza)是由A型流感病毒(AIV)引起的使患病禽类表现严重的呼吸困难、产蛋力降低及隐性感染的一种禽类常见疾病[1]。其中H5亚型高致病性AIV由于具有致死率高的特点，对养禽业和公共卫生安全造成了严重的威胁[2-4]。

血凝素蛋白(HA)是构成流感病毒囊膜纤突的主要成分之一，研究表明，HA参与流感病毒和宿主细胞的吸附过程，HA蛋白的裂解也与流感致病性有关[5]，抗HA的抗体可以中和病毒的感染力。近年来研究表明基于HA蛋白的基因工程疫苗具有良好的免疫效力[6-9]。为研究表达AIV同义HA基因编码蛋白对H5亚型不同抗原群AIV的交叉保护，我们构建表达H5亚型同义HA基因(Cons-HA5)的重组表达质粒pCACons-HA5，对该真核重组表达质粒在不同时间段的表达情况进行了研究，以期为进一步对pCACons-HA5的免疫效力的研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1 菌株、细胞及质粒 大肠杆菌JM109感受态细胞购自北京庄盟生物公司；293T细胞以及真核表达质粒pCAGGS由哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室保存。

1.2 主要试剂及仪器 DNA分子量Marker，rTaq DNA聚合酶购自TaKaRa公司；限制性内切酶以及连接酶购自于NEB公司；DNA胶回收试剂盒及小量质粒DNA提取试剂盒购自于OMEGA公司；……