李婷婷，陈 斌，陈省平，刘 翠，姚 雪，陈伟洲，赖学文，刘 涛

(1.中国海洋大学海洋生命学院，山东 青岛 266003；2.中山大学中山医学院，广东 广州510080；3.汕头大学，广东 汕头 515063；4.汕头市水产研究所，广东 汕头 515000)

江蓠科Gracilariaceae在自然分类系统上属于红藻门Rhodophyta江蓠目Gracilariales，包括江蓠属Gracilaria、龙须菜属Gracilariopsis、蓠生藻属Gracilariophila、Hydropuntia、Curdiea、Melanthalia和Congracilaria7个属。在红藻门中，江蓠科无论是解剖学层面[1-3]还是分子学层面[4-6]，都是很明确的一个科，但是因缺乏足够多的形态学和生殖结构特征，其属间种间存在着复杂的分类关系[7-10]。在过去的20年里，分子生物学技术不断的应用到江蓠科分类研究中，揭示江蓠科种水平上的系统发生关系。目前江蓠科分子系统学研究多采用18S rDNA[10-11]、Rubisco spacer[11-13]、ITS(internal transcribed spacer)[10，12，14]、rbcL[15-18]、cox2-3[13，19]和psbA[16]等序列。

ITS序列包括ITS1和ITS2，是分别介于18S与 5.8S、5.8S 与28S rDNA之间的非编码序列,呈ITS1-5.8S-ITS2结构(本文将ITS1-5.8S -ITS2简称为ITS)。此结构中5.8S 是高度保守的基因序列，而ITS1和ITS2是进化速度较快的序列，利用ITS序列可以从不同分类水平上探讨系统进化关系。本文通过对来自江蓠属和龙须菜属总5个物种23个种群的ITS序列进行扩增，并与GenBank中江蓠科海藻ITS序列进行比对分析，从分子水平上阐明江蓠科海藻系统发育和种群水平的遗传变异，为江蓠科海藻的分类和鉴定提供更多数据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

本实验所用江蓠科海藻5个物种23个群体由中国海洋大学大型海藻种质库提供(见表1)。每个群体选取2～3株个体进行实验，总66株实验材料。

表1 实验材料信息1)

1.2 实验方法

1.2.1 总DNA提取 总DNA提取采用改进的CTAB法[20]。所提取DNA用w=1％琼脂糖凝胶进行电泳检测，使用NanoDrop ND-1000仪器，测定A260/A280、A260/A230比值，对DNA浓度和纯度进行质量评价，并将DNA模板浓度统一调整到50 ng/μL。……