侯丽华，于雁飞，王 川，王春玲

(食品营养与安全教育部重点实验室，天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457)

鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)又称 S酵母，主要应用于酱油的高盐稀态发酵过程中，用以改善酱油的风味[1-2]．S酵母是与模式生物酿酒酵母相近的半子囊菌酵母．鲁氏酵母可在高盐的环境中生长，比如，在酱油高盐稀态发酵工艺的后期盐水发酵中含盐量高达17%，鲁氏酵母依然能够生长及发酵[3].但是在此环境中包括酿酒酵母在内的大多数酵母都不能生长．

目前，一些关于鲁氏酵母的耐盐、耐渗的基因，如 ZrPMA1、ZrSOD2、ZrSOD22、ZrGPD1、ZrHOG1和 ZrHOG2等已经被克隆和测序[4-6]．其中，GPD1即 3–磷酸甘油脱氢酶(glycerol-3-phosphate dehydrogenase)的编码基因，其编码的酶可使磷酸二羟丙酮生成 3–磷酸甘油，从而增加甘油含量，在酵母耐盐的渗透调节中发挥举足轻重的作用[7]．因此，本文对鲁氏酵母的耐盐基因 GPD1进行研究，使其在模式酵母即酿酒酵母实验室菌株W303中过量表达，研究其对酿酒酵母耐盐性、甘油产量等的影响，为构建耐盐菌株奠定理论基础，为阐述酵母菌株的耐盐机制提供更多的理论依据．

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株、质粒和培养基

鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)、酿酒酵母W303(Saccharomyces cerevisiae W303，MATa，leu2-3/112，ura3-1，trp1-1，his3-11/15，ade2-1，can1-100，GAL，SUC2，mal 0)、多拷贝酵母(S. cerevisiae)与大肠杆菌(E. coli)的穿梭质粒 YEplac195(Ampr，URA3)，为本实验室保存．

YPD 培养基(g/L)：酵母浸粉 10，葡萄糖 20，蛋白胨 20，121,℃灭菌 20,min．其中，40%葡萄糖溶液115,℃灭菌20,min后，加入培养基中使含量达到2%．

CM-ura培养基(g/L)：无氨基酸的酵母氮源(YNB)6.7，腺嘌呤0.05，组氨酸0.1，色氨酸0.1，亮氨酸0.1，精氨酸0.02，天冬氨酸0.1，谷氨酸0.1，异亮氨酸0.03，赖氨酸0.03，甲硫氨酸0.02，苯丙氨酸0.05，丝氨酸0.15，苏氨酸0.15，酪氨酸0.03，缬氨酸0.15，调节pH为6.5，加入1.5%的琼脂，121,℃灭菌 15,min．