张凤梅，杨 柳，孟昭宇，吴亿勤，伊奥尔，牟定荣

(红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心，云南 玉溪 653100)

烟草特有亚硝胺(TSNAs)是烟草中N-亚硝胺含量最丰富的一类亚硝胺物质，只存在于烟草、烟草制品和卷烟烟气中。目前研究较为深入的TSNAs包括N-亚硝基去甲基烟碱(NNN)、N-亚硝基假木贼碱(NAB)、N-亚硝基新烟草碱(NAT)和4-(N-甲基-N-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-丁酮(NNK)。由于对健康的关注，出现了一系列TSNAs的检测方法，主要集中在GC-TEA法[1]和LC-MS/MS法[2～4]。然而，GC-TEA法前处理纯化步骤多、分析周期长、溶剂耗量大、检测器专属性强、样品通量低、环境污染严重，LC-MS/MS法又需要SPE纯化的前处理步骤或不能很好地消除基质的干扰。为此，作者在前人工作的基础上，优化了LC-MS/MS前处理方法，建立了一种快速、准确的TSNAs测定方法。

1 实验

1.1 试剂与仪器

超纯水，甲醇、乙酸铵、乙酸为色谱纯。

标准品：NAB、NAT、NNK、NNN、NAB-d4、NAT-d4、NNK-d4和NNN-d4，纯度≥98%，加拿大TRC公司。

API3200QTRAP型质谱仪，美国应用生物系统公司；Waters Acquity型超高效液相色谱仪，美国Waters公司；Cerulean SM450型直线式吸烟机，Cerulean Ltd.；Milli-Q50型超纯水仪，美国Millipore公司；KQ-700DE型数控超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司；CP2245型电子天平(感量0.1 mg)，德国Sartorius公司。

1.2 色谱条件

色谱柱：C18柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；流速0.4 mL·min-1；柱温40 ℃；进样量5 μL；流动相A：甲醇，流动相B：0.2%的乙酸溶液；梯度洗脱条件见表1。

表1 高效液相色谱梯度洗脱条件

1.3 质谱条件

离子源：电喷雾电离源(ESI)；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测MRM；电喷雾电压：5500 V；离子源温度：650 ℃；辅助气Gas1压力：0.345 MPa；辅助气Gas2压力：0.483 MPa；各分析物的定量离子对、定性离子对及碰撞能量(CE)见表2。

1.4 工作溶液

按浓度梯度为1 ng·mL-1、2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1配制NNN、NAB、NAT和NNK的标准溶液(甲醇为溶剂，内标NNN-d4、NAB-d4、NAT-d4和NNK-d4的浓度为10 ng·mL-1)。……