任羽 张建安 朱玉山

摘 要:目的:构建头孢菌素C酰化酶(Cephalosporin C Acylase)基因的两种原核表达载体,确定高效原核表达体系。方法:人工合成头孢菌素C酰化酶S12基因,分别克隆到含有Lac启动子的载体pBC KS和T7-lac启动子的载体pET-28a上,命名为pBC-S12和pET-28-S12,重組质粒分别转化感受态大肠杆菌DH5α和BL21(DE3),表达纯化目的蛋白S12,测定酶活。结果:成功地构建了头孢菌素C酰化酶S12的原核表达菌株,组成型表达和诱导型表达体系的表达量低,目的蛋白具有酶活,诱导型表达产生的酶比组成型表达产生的酶具有更强活性,可作为大肠杆菌表达头孢菌素C酰化酶的高效表达体系。