孙丽丽 （山东省诸城市畜牧兽医管理局 262200）



尼帕病毒病诊断技术

孙丽丽 （山东省诸城市畜牧兽医管理局 262200）

尼帕病毒病是由尼帕病毒(Nipah virus)感染引起的人畜共患病。其特征为急性发热性脑炎和高死亡率。病原体是副粘病毒科(Paramyxoviridae)副粘病毒亚科(Paramyxovirinae)的亨尼帕属(Henipavirus)成员，毒力强。本文就尼帕病毒病诊断技术进行简要概述。

1 病原学诊断技术

1.1 病毒分离 在无菌情况下处理受检样品。用密闭的匀浆器处理含10%(w/v)组织样品的悬浮液，如在密闭的金属筒中用高压灭菌的金属球进行研磨，或者在罩袋式匀浆器中进行研磨。样品磨碎后，300g离心，将上清加入到培养的Vero细胞或兔肾细胞(RK-13)中。NiV感染细胞后，引起的CPE的特征是出现细胞融合现象：经过24~48h，有些融合的细胞可含有60个以上的细胞核，并且融合细胞的细胞核分布在融合细胞的周围。如果没有出现CPE，应该再盲传2次，每次培养5d。

1.2 分子生物学诊断 对于Nipah病毒与Hendra病毒的诊断，PCR检测是很常规的方法，AAHL所建立的方法，是基于Nipah病毒与Hendra病毒的M蛋白基因的保守序列所设计的引物，进行巢式PCR扩增。这种RT-PCR方法可以用于固定的或新鲜的组织样品进行诊断，或对脑脊髓液进行诊断，也可以对细胞培养分离物进行快速鉴定。在美国CDC使用的是另一种方法，这种PCR是基于N基因之上的，在刚开始使用的PCR方法是基于P基因。Real time–PCR具有快速、准确的特点，也被应用于对这两种病毒的检测，Smith等首先建立了针对Hendra病毒M基因的Real time–PCR检测方法，可以在4h内得到检测结果。Guillaume等建立了针对Nipah病毒N基因的Real time–PCR检测方法，检测灵敏度能达1PFU的病毒量，该方法适合对自然感染样品或流行病学样本进行检测。……