微流控PCR装置中温度控制技术评述*
2012-04-01王贻坤
刘 勇,高 娜,朱 灵,李 飞,王贻坤,张 龙
(中国科学院安徽光学精密机械研究所光电子技术研究室,安徽合肥 230031)
0 引言
20世纪90年代初,Manz A和Widmer H M首次提出微型全分析系统(miniaturized total analysis systems)的概念[1],其核心是微流控芯片,即以微机电系统(micro-electro-mechanical systems,MEMS)技术为依托,通过控制微通道中的流体将取样、预处理、反应、分离和检测等操作集成在微芯片上进行,实现分析系统的微型化、集成化、自动化与便携化[2]。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是Mullis于1985年发明的一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。PCR的原理[3]类似于DNA的体内复制,在试管中给DNA的体外合成提供模板DNA、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、Mg2+、合适的缓冲体系,进行DNA模板的变性,引物与模板的退火和引物的延伸,经过多次变性、退火和延伸后,待扩增的DNA分子或者片断可放大几十甚至几百万倍。
在PCR的热循环中,温度直接影响PCR扩增成功与否,较大的温度偏差会导致扩增失败:变性温度太高会影响DNA聚合酶的活性;退火温度过低会导致大量非特异性产物出现,而过高又会使扩增效率下降;不合适的延伸温度也会对扩增产物的特异性、产量造成影响[3]。近年来研究表明[4]:提高PCR热循环中3个温区之间的升降温速率,不仅能够缩短整个PCR扩增过程所需时间,而且特异性更好。微流控芯片为PCR微型化操作提供了一条可行的途径,较小的反应体积不仅可以大大减少试剂消耗还可提高升降温速率。
1 微流控PCR装置中加热方式和冷却方式
加热和冷却方式直接影响温度的升降温速率,决定了PCR扩增所需的时间。……
