刘东明， 束长龙， 宋福平， 高继国， 张 杰

（1．东北农业大学生命科学院，哈尔滨 150030；2．中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193）

苏云金芽胞杆菌（Bacill us thuringiensis，简称Bt）是一种革兰氏阳性细菌，在形成芽胞的同时能产生由cr y与cyt基因编码的、对多种害虫具有高毒力的杀虫晶体蛋白（insecticidal cr ystal pr otein，简称ICP）。由于其对害虫特异的杀虫活性，对人畜无害且不污染环境等优点，Bt已经成为最为有效的微生物杀虫剂，广泛应用于害虫的生物防治［1］。分离新型高效的Bt菌株与杀虫基因对进一步开发Bt杀虫剂与转基因作物有重要的意义。

Bt广泛存在于自 然界中，从 土壤［2－3］、水源［4－6］、昆虫尸体［7］、野生动物［8－11］、植物表面［12］等都可以分离出Bt。其中，土壤作为微生物生存的最佳介质，是Bt菌株最直接的来源，并且样品采集地的气候、植被也会影响到Bt菌株分布［13］。因此，从不同气候、地域特征的生态环境中采集土壤样品，有利于筛选到类型多样的Bt菌株。

苏云金芽胞杆菌休眠的芽胞在75℃的亚致死温度下处理15 min，活化效果最好［14］，依据这一特性采用温度筛选分离Bt具有分离范围广，不易漏筛等优点。获得的大量Bt野生菌株根据大质粒图谱进行分型，质粒图谱是菌株含有的质粒的琼脂糖凝胶电泳条带，与菌株含有的质粒数量、大小以及拷贝数都有关，可以作为区分不同菌株的证据［15］。采用PCR－RFLP方法鉴定Bt的杀虫基因，不但具有快速、简便的优点，而且既可鉴定出已知的基因又可检测出未知的新基因，因此PCR－RFLP鉴定体系获得了广泛的应用［16－18］。……