李泰明，谷春娇，葛晓宇，李哲哲，王丹，马艳红，刘涛，张美由，李丽，刘景晶

中国药科大学天然药物活性组分与药效国家重点实验室，江苏 南京 210009

Exendin-4是从希拉毒蜥唾液中分离到的一种含有 39个氨基酸的多肽，与人胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 有 53%的同源性[1]。作为 GLP-1受体激动剂，Exendin-4具有促进葡萄糖依赖性的胰岛素分泌[2]，刺激胰岛 β细胞再生[3]，抑制餐后胰高血糖素的产生、延迟胃排空、抑制食欲等作用[4-5]，并且其半衰期远远长于 GLP-1[6]。Exendin-4的这些生理功能使其在 2型糖尿病的治疗中显示了广阔的前景。

化学合成的Exendin-4的酰胺化修饰类似物已于2005年在美国FDA批准上市 (商品名Byta)[7]，但化学合成的Exendin-4类似物存在成本较高，价格昂贵，步骤多，收率低，过程涉及有害化学物质等缺点[8]。现有的基因工程方法合成的Exendin-4常出现表达量较低的情况[9-11]，一方面可能是由于天然Exendin-4 C端36-39位氨基酸存在 PPPS的刚性结构，有研究表明[12-13]，Exendin-4 C端的 31-39位氨基酸形成的色氨酸笼子在与GLP-1受体的结合方面作用很小，截去了PPPS对活性影响不大，所以本实验优选了截短型的 Exendin-4[14]，并在截短型的 Exendin-4的N端添加2个脯氨酸与融合伴侣C端的天冬氨酸形成酸水解位点；另一方面是由于小分子多肽在大肠杆菌表达系统中容易降解[15]，本实验室将Exendin-4类似物与一含有132个氨基酸的融合伴侣通过酸水解位点连接，在大肠杆菌中实现了融合蛋白的高表达，不需要使用较为昂贵的肠激酶等[16-17]，在盐酸作用下即可将融合伴侣与目的肽分离，根据目的肽与融合伴侣等电点的……