张超，单丽伟，苏帅坤，南艳妮，郭忠玉，范三红

1 西北农林科技大学生命科学学院，陕西 杨凌 712100

2 西北农林科技大学理学院，陕西 杨凌 712100

过氧化物酶广泛存在于植物界，它们参与植物激素代谢、细胞延伸、木质素和软木脂形成、细胞壁组分交联及逆境响应等重要生理及发育过程[1]。同时，植物过氧化物酶也作为重要的商品酶应用于生物催化、临床检测和生物技术研究等领域[2-3]。小麦种子过氧化物酶 1 (Wheat peroxidase 1，WP1) 属于含血红素的Ⅲ型植物过氧化物酶，其以 H2O2为电子受体催化多种芳香族化合物的氧化。该酶具有抗真菌活性，可抑制病原真菌芽管的伸长[4]；同时该酶的存在对面粉加工性能有重要影响[5-8]。利用大肠杆菌系统表达植物过氧化物酶已有一些报道，如辣根过氧化物酶HRP C、芜青根过氧化物酶BnPA、烟草阴离子过氧化物酶TOP、杨树细胞壁阳离子过氧化物酶CWPO_C[9-12]，但重组蛋白均主要以包涵体的形式存在，只有经过变性复性才能获得具有部分活性的酶蛋白。本研究组曾尝试利用大肠杆菌系统表达 WP1，虽然通过融合麦芽糖结合蛋白(MBP) 标签实现了重组WP1的可溶性表达，但仍只能检测到微弱的过氧化物酶活性[13-14]。导致上述结果可能有两个原因：一是大肠杆菌血红素合成量不能满足需求，导致大部分蛋白以脱辅基形式存在；二是肽链不能正确折叠，二硫键不能正确形成，导致目标蛋白以包涵体形式存在。

关于增加大肠杆菌菌体内血红素的累积已有很多报道，根据原理可分为两种策略。……