人巨细胞病毒感染人源细胞后的蛋白质检测
2012-02-07杨海青朱剑梅邱发麒邓成莲何英游传蓉
杨海青,朱剑梅,邱发麒,邓成莲,何英,游传蓉
(四川省医学科学院·四川省人民医院城东病区内一科,四川 成都 610101)
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)属疱疹病毒科,是一种常见的机会性感染病原体,在成人中的感染率可达90%,其中绝大部分为“健康带毒状态”,即血清中可检测到抗HCMV-IgG阳性,但无相关病毒疾病症状出现[1]。初始感染后,病毒基因组进入单核细胞并潜伏。免疫机能低下的状态时,如获得性免疫缺陷综合征(AIDS)和器官移植后使用免疫抑制剂的患者,HCMV可再次活化并导致严重的CMV疾病。
HCMV在体内可感染多种细胞,包括成纤维细胞、内皮/上皮细胞、平滑肌细胞、单核/巨噬细胞、中性粒细胞,但只能在少数细胞内成功复制并产生有感染力的病毒,包括单核/巨噬细胞、成纤维细胞及内皮细胞[2]。感染过程是衣壳蛋白参与病毒与细胞膜的融合,使病毒核衣壳进入胞浆,DNA-蛋白质复合物进入核孔[3]。正常状态下,病毒基因组整合于细胞基因组内并随细胞DNA复制,形成长期潜伏感染状态。在免疫低下状态时,病毒DNA复制并在细胞内装配成成熟的病毒颗粒,通过内质网运输到细胞表面,释放到细胞外。在HCMV感染宿主细胞中,衣壳蛋白B(glycoproteinB,gB)起重要作用,可与细胞膜融合,并与衣壳蛋白gH、gL形成三聚体,还与细胞膜表面手体(整联蛋白α2β1、α6β1和αVβ3)结合,完成感染[4]。
本研究选用人间充质干细胞(human marrow stromal cell,HMSC)、人胚成肌细胞(humanembryomyoblasts,HEM)、人皮肤成纤维细胞(human demal fibroblasts,HDF),检测其对HCMV的易感性,并通过Western-blot的方法检测感染后蛋白质的表达情况。
1 材料与方法
1.1 病毒珠及细胞培养 HCMV病毒珠购自ATCC(VR-807)。……
