Raynald，李延滨，郭牧遥，黄 华，张 涵，于 昊，李海龙，崔福斋，安沂华

（1.首都医科大学，北京市神经外科研究所，北京 100050；2.清华大学材料科学与工程系，北京 100084）

脊髓损伤是一种严重危害人类健康的中枢神经系统疾病，可导致感觉和运动功能丧失，目前对其后遗症缺乏有效的治疗手段。随着干细胞及组织工程学技术的发展，细胞复合生物材料移植治疗中枢神经系统损伤得到了更多的关注。本研究利用骨髓间充质干细胞作为种子细胞，透明质酸—多聚赖氨酸材料作为支架，研究其复合物对脊髓损伤的修复效果。

1 材料和方法

1.1 材料

Spraque Daw ley（SD）大鼠（中国医学科学院实验动物研究所SCXK（京）2009-0017）；细胞培养试剂：DMEM，10％牛血清（GIBCO Company）；手术器械：YZ20P5手术显微镜（苏州六六视觉科技股份有限公司）；倒置显微镜（Nikon）；电镜（Hitachi TEM system）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养：将5 mL已抗凝的人骨髓与等体积PBS混合，室温下900 g离心10 min，沉淀物用PBS洗2次；细胞重悬，密度为4×107/mL；密度梯度离心法分离单个核细胞，重悬于DMEM（低糖）+ 15％胎牛血清培养基中，置于37℃、5％CO2的培养箱中培养；每3～4 d换一次培养基；细胞至90％融合时，0.25％胰酶/EDTA消化，传代培养；

1.2.2 透明质酸-多聚赖氨酸（HA-PLL）材料的制备：HA在EDC（碳化二亚胺，1-（3-dimethylam inopropyl）-3-ethylcarbodiim ide）的介导下与PLL反应，避光过夜保存，溶液缓慢交联成凝胶；将上述凝胶用去离子水在超声波中清洗三次去除残留物，-20℃冷冻后放入冻干机内进行冷冻干燥。48 h后得到多孔框架材料［1］。

1.2.3 实验动物分组：体重200～220 g的雌性SD大鼠32只，随机分为4组，单纯损伤组（8只）、hBMSC移植组（8只）、HA-PLL移植组（8只）、hBMSC-HA-PLL移植组（8只）。

1.2.4 脊髓半横断模型的制作：水合氯醛（0.4 m L/100 g）腹腔注射麻醉。……