董 魁，贾 挺，刘 丽，姜其声，金孟民，林海涛，吴晓玲，庄云龙

(山东省血液中心，济南250014)

人类白细胞抗原(HLA)位于6号染色体短臂区域，是由一组紧密连锁的基因座所组成的具有高度多态性的遗传复合体。HLA 是机体内特异性免疫识别和免疫应答的主要成分，是影响造血干细胞移植成功的关键因素之一，具有显著的人种、民族和地域差异。截至2011年4月，HLA-A位点的等位基因数目已达1 601个，其中HLA-A*02家族包含了405个等位基因。HLA-A*02等位基因在不同地区和种族中的分布存在较大差异，且该基因家族某些等位基因错配会导致接受造血干细胞移植的患者发生重度急性移植物抗宿主病(aGVHD)，而该基因家族的另一些错配对移植结果无不良影响［1，2］。HLA-A*02是山东骨髓库中最主要的HLA-A等位基因之一，其等位基因水平多态性尚无资料积累。本研究旨在调查分析山东骨髓库汉族人群HLA-A *02位点各等位基因的分布情况，初步评估山东汉族人群HLA-A*02位点匹配情况及移植风险，为HLA-A*02患者在山东骨髓库寻找合适的供者提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 随机选取750例山东汉族骨髓志愿捐献者(男401例、女349例，年龄23～45岁，平均36岁)的EDTA抗凝全血。

1.2 HLA-A*02等位基因检测 采用 EZ Bead system-32 DNA提取工作站提取DNA并测定OD260和OD280值，调整DNA浓度。以提取的DNA为模板，Taq酶(0.037 5 U)和包含引物(1 μM)等的混合物共10 μL;PCR反应体系扩增HLA-A基因的外显子和内含子序列。PCR扩增反应参数为96℃、2 min，1个循环;96℃、30 s，65℃、30 s，5个循环;72℃、120 s，96℃、30，62℃、30 s，35个循环;72℃、120 s，10℃、4 h。反应结束后取2.5 μL于1.5%的琼脂糖凝胶上检验扩增产物。在对应阳性孔内的EP管中加入FastAP(1 U/μL)0.8 μL和Exonuclease I(20 U/μL)0.2 μL，混匀后于PCR仪中37℃、15 min，85℃、15 min。……