刘 伟

(河南省新蔡县人民医院儿科 河南 驻马店 463500)

副流感病毒(PIV)属副粘病毒科［1，2］，在新生儿和 小婴儿 PIVⅢ的感染率仅次于呼吸道合胞病毒(RSV)。本研究采用2005年6月至2010年12月入住新蔡县人民医院的急性呼吸道感染患儿为研究对象，检测其鼻咽分泌物副流感病毒3型抗原及共外周血免癌细胞的变化，以期为临床治疗提供参考。

1 临床资料和方法

1.1 一般资料 自2005年6月至2010年12月，收集因急性呼吸道感染而住我科治疗的患儿鼻咽分泌物4 538例，男2 367例，女2 171例。年龄1～13岁，其中≤1岁2 579例，1～3岁939例，＞3～13岁1 020例。肺炎诊断参照有关标准［3］。

1.2 上呼吸道感染的病原检测方法 由专职护士在患儿入院当日或次日采集其鼻咽分泌物，送实验室待检。采用直接荧光法检测呼吸道分泌物中的PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型抗原。试剂盒为美国Chemicon公司产品。按试剂说明书操作。结果判断:如果一孔涂片中含有细胞数大于200个，且2%(或5个)以上的细胞显示有细胞内染色为阳性。其中PIV显示为细胞浆内染色。

1.3 上呼吸道感染的体液免疫检测方法 IgM抗体检测采用酶联免疫吸附试验法，检测试剂盒由德国IBL生产。于PIV患儿入院第2～5天取血样，检测血清中PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型的IgM抗体，酶标仪检测出PN值(标本测定值/阳性对照测定值)≥2.1判为阳性。其中病毒IgM抗体阳性者的血清并用免疫投射比浊法进行免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的检测。试剂盒由上海玉兰生物技术研究所生产。

1.4 淋巴细胞亚群 花青藻红素25(PE2CY5)标记抗CD3+抗体、CD19+抗体，异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗CD4+抗体，藻红朊(PE)标记抗 CD8+抗体、CD16+CD56+抗体。取外周血，肝素抗凝，每管100μl全血中加入不同荧光素标记的抗体，轻轻混匀后暗室下孵育，然后加入溶血素(OptiL-yse)裂解红细胞，轻轻混匀后再次暗室下孵育，经离心、洗涤后在流式细胞仪上进行分析。

1.5 统计学处理 采用SPSS11.5软件进行卡方检验比较频率，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 分布情况 检出感染PIV标本218例中PIVⅠ阳性23 例(10.6%)，PIVⅡ阳性1 例(0.45%)，PIVⅢ阳性194例(90.0%)。PIVⅢ感染与年龄的关系:≤1岁PIVⅢ阳性151/194例(77.8%)，＞1岁PIVⅢ阳性43/194 例(22.2%)。见表1。

表1 急性呼吸道感染中PIV检测结果［n，(%)］

2.2 患儿体液免疫功能 218例PIV标本中IgM抗体阳性者(1～13岁)血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的检测结果(表2)。≤1岁的患儿的IgG低于参考范围，1～13岁的患儿IgM均高于正常水平。

表2 PIVⅢ感染患儿血清IgG、IgA、IgM检测结果()

表2 PIVⅢ感染患儿血清IgG、IgA、IgM检测结果()

IgG IgA IgM≤1岁组别 n 14 10.23 ±1.46 1.59 ±0.42 1.89 ±0.48 151 6.23 ±1.96 1.01 ±0.52 1.59 ±0.48 1～3 岁 29 8.40±2.15 1.19 ±0.29 2.05 ±0.78 3～13岁

2.3 淋巴细胞亚群检测 副流感病毒Ⅲ型感染肺炎患儿外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+细胞、CD19+CD21+B细胞百分比和对照组相仿;CD16+CD56+T细胞百分比较对照组减少(P＜0.05);CD4+/CD8+比值较对照组升高(P＜0.05)。见表3。

表3 PIVⅢ感染患儿细胞免疫各指标比较()

表3 PIVⅢ感染患儿细胞免疫各指标比较()

组别 CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD4+/CD8+CD19+CD16+CD56+感染组 62.2 ±10.8 37.5 ±8.42 22.4 ±5.85 1.77 ±0.72 28.5 ±11.1 6.60±3.66对照组 60.2 ±5.05 33.8 ±4.86 23.0±4.81 1.57 ±0.41 25.6 ±5.40 10.3 ±2.63 P 0.816 0.146 0.153 0.041 0.314 0.021

3 讨论

副流感病毒(PIV)属副粘病毒科，为单链RNA病毒［4］。到3岁时，多数儿童感染过PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ，近年的国内外研究显示，PIV是小儿呼吸道病毒感染的重要病原，亦是导致小儿呼吸道感染住院的重要原因，此外，PIVⅢ经常导致肺炎和细支气管炎。健康儿童很少能从鼻咽部分离到PIV，因此患儿鼻咽分泌物中检测到这些病毒即可确定为致病原［5］。本院通过对因急性呼吸道感染而住院治疗的患儿进行PIV的统计，发现PIV的检出率为4.8%，而PIVⅢ在PIV感染中所占比例最高，为89.4%。同时，结果表明小婴儿尤其易感PIVⅢ。

因此，及时准确的了解PIVⅢ肺炎患儿的各项免疫指标变化，对于临床治疗有重要意义。本研究表明，PIVⅢ肺炎患儿外周血 CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+细胞、CD19+CD21+B细胞百分比和对照组相仿;但CD16+CD56+T细胞百分比较对照组减少(P＜0.05);而 CD4+/CD8+比值较对照组升高(P＜0.05)。

CD16，CD56是人NK细胞的表面标志。NK细胞表面的CD16是低亲和力的IgG Fc受体，当IgG抗体与靶细胞表面相应表位特异性结合后，可通过其Fc段与NK细胞表面的FcγRⅢ结合，促使NK细胞脱颗粒，释放穿孔素和颗粒酶，发挥对靶细胞的定向非特异性杀伤作用［6］。CD16+CD56+T细胞百分比较对照组减少(P＜0.05)表示NK细胞不能发挥正常的免疫功能，导致其清除病原的能力下降。

CD4+分子表达在Th细胞表面，CD8+分子主要表达在Ts细胞和Tc细胞表面。T淋巴细胞在免疫应答和免疫调节中起重要作用。CD4+/CD8+比值较对照组升高(P＜0.05)，表明T细胞功能紊乱，不能维持机体正常的免疫功能［7］。

因此，PIVⅢ患儿免疫功能的调节是临床治疗的重要突破口之一。

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