崔萌萌

（中国农业科学院烟草研究所，青岛 266101）

通过激活标签技术（activation tagging）得到突变群体是构建突变体库的一种重要方法，应用此种方法研究基因功能，不管是用正向或反向遗传学方法，都必须先获得插入位点的侧翼序列（flanking sequence）。随着拟南芥、水稻及烟草等作物的侧翼序列数据库的不断完善及烟草全基因组测序的完成，越来越体现出激活标签技术对于推动烟草功能基因组学研究具有巨大的潜力。

1 T-DNA激活标签插入群体构建

T-DNA激活标签技术是从早期的T-DNA标签技术发展改良而来的，早期的T-DNA标签技术是将人工构建的T-DNA通过Ti或Ri质粒携带，用农杆菌介导的方法[1]随机插入到植物基因组中，通常得到的是功能缺失型突变体，并不适于功能冗余基因、多发育阶段作用基因、环境变化相关基因的研究。T-DNA激活标签是在 T-DNA的边界加入强启动子或多个串联增强子，从而增强插入区附近（上游或下游）基因的表达，产生显性功能获得型（dominant gain of function）突变体，且这种突变是可稳定遗传的。通过对激活标签载体T-DNA区加入筛选标记（如抗除草剂Basta的Bar基因和抗卡那霉素的nptH基因）[2]可以筛选阳性植株。当激活标签插入到基因内部时也会产生传统插入失活突变体。2012年采用叶盘转化法通过农杆菌侵染将激活标签载体pSKI015转入烟草品种红花大金元中，获得了具有Basta抗性的转基因突变体T0代近4万份。

2 激活标签突变体的初步筛选

由于通过激活标签技术产生的功能获得型突变体表型为显性，所以在当代即可进行初步的表型筛选，通过观察得到一些外观性状明显的突变表型；……