任岩海，刘洪凤，宋铁军，韩智学

(1．牡丹江医学院红旗医院，黑龙江 牡丹江 157011;2．牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011;3．牡丹江医学院第二附属医院，黑龙江 牡丹江 157011)

随着人们生活水平的提高，糖尿病的发病率呈逐年上升趋势。大量研究表明，胰岛素抵抗是2型糖尿病的主要病理生理机制，因此，针对胰岛素抵抗的治疗和预防研究对于治疗T2DM至关重要。近年来的研究证实，脂肪组织在胰岛素抵抗及胰岛素抵抗相关疾病的发生发展过程起着关键性的作用。抵抗素是Steppan等人发现的源于脂肪组织中的分泌型多肽，抵抗素在白色脂肪组织中特定表达且与T2DM关系密切。以Resistin为靶标已经成为T2DM的热点研究课题［1］。

桑叶是桑科桑属植物桑的叶子。桑叶有降血糖作用。研究表明，桑叶多糖(mulberry leaves polysaccharide，MLP)是其降血糖作用的主要功效成分［2－6］。本实验通过观察MLP对T2DM大鼠的Resistin蛋白表达的影响，探讨MLP对T2DM大鼠的降糖机理，为桑叶资源的综合开发利用提供科学的实验依据。

1 材料与方法

1．1 材料

清洁级Wistar大鼠(牡丹江医院动物实验室提供，动物许可证号:SCXK黑2006－010);链脲佐菌素(Sigma公司);MLP(南京泽朗医药技术有限公司)。

1．2 方法

1．2．1 大鼠模型的制备及分组

Wistar大鼠80只，随机选取70只造模，高脂高糖饮食喂养;另取大鼠10只，给以基础饲料饮食。8周后，尾静脉一次性注射链脲佐菌素25mg/kg;A:空白组大鼠，注射相同体积的柠檬酸钠－柠檬酸缓冲液。72h取尾静脉血测定，以11.1mmol/L≤FBG＜33.3mmol/L且伴有糖耐量减退和IR为T2DM模型制备成功，余者弃掉。将造模成功的40只大鼠随机分为4组:B:模型对照组及 C、D、E 组:1．0、0．5、0．25g/kg/d MLP 高、中、低剂量治疗组。A、B组腹腔注射相同体积生理盐水，C、D、E组腹腔注射桑叶多糖，用药12周后，空腹取材后处死大鼠。

1．2．2 总蛋白质的提取

肾周白色脂肪组织提取0．1g，加入细胞裂解液匀浆后移入EP管中，冰浴10min备用。细胞超声破裂仪碎裂细胞，分光法测蛋白浓度后等浓度分装，－70℃冻存备用。

1．2．3 Resistin 蛋白质的分离

首先配制分离胶(12%)、浓缩胶(5%)。凝胶制成后取6只Ep管，分别加入SDS－PAGE低分子量蛋白标准上样液 10μl;A、B、C、D、E 组蛋白上样液各40μl。开始电泳，当条带距离凝胶边缘2cm处，切断电源停止电泳，进行染色和脱色，用凝胶成像系统扫描分析电泳结果。

1．3 统计方法

实验数据用SPSS13．0软件处理。

2 结果

SDS－PAGE电泳结果图像如图1所示:Marker为蛋白分子量标准，分子量12．5KD为 Resistin蛋白。Resistin/Marker灰度比值见表1所示:模型组Resistin蛋白表达为比正常组显著增高(P＜0．01);与模型组比较，桑叶多糖高、中、低剂量治疗组Resistin蛋白表达显著降低(P＜0．01)。

图1 大鼠脂肪细胞Resistin蛋白质表达产物分析

表1 桑叶多糖对大鼠脂肪细胞Resistin蛋白质表达的变化(±s)

表1 桑叶多糖对大鼠脂肪细胞Resistin蛋白质表达的变化(±s)

注:与 A 组比较，*P ＜0．01;与 B 组比较，#P ＜0．01。

组别n Resistin/Marker A 10 0．18 ±0．07 B 10 0．32 ±0．08*C 10 0．25 ±0．05*#D 10 0．22 ±0．07*#E 10 0．28 ±0．06*#

3 讨论

2型糖尿病是一种代谢紊乱性疾病。IR贯穿于2－DM的整个发生发展过程中［7－10］。本实验结果表明，MLP能有效降低2－DM大鼠白色脂肪组织Resistin蛋白表达，说明MLP可能是通过抑制脂肪组织抵抗素的表达，降低IR水平，从而降低2－DM大鼠的胰岛素抵抗状态，从而达到治疗糖尿病的目的。但MLP降糖的其他机制有待于进一步深入研究探讨。实验研究表明，桑叶多糖具有较好的降血糖作用，且作用机制是多方面的，值得对其进行深入研究。

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