王泽慧，边云飞，肖传实

血管平滑肌细胞（VSMC）的异常增殖是高血压血管重构以及血管增殖性疾病，如动脉粥样硬化、经皮腔冠状动脉介入治疗术（PCI）后再狭窄、血管移植术后新生内膜增生等发生发展的主要病理基础。

microRNA可以调节多种基因的表达。近年来发现miR－145是正常动脉中含量最丰富的miRNA，且主要聚集在VSMC［1］。miR－145在原代培养的VSMC中含量最丰富而在去分化的VSMC中的表达是下调的［2］。本实验室前期已经成功构建了大鼠miR－145重组慢病毒载体并在去分化型VSMC中过表达，但是miR－145是否能抑制去分化型VSMC增殖及其机制仍不清楚。故本实验以体外培养的大鼠原代VSMC为模型，应用PDGF－BB作为外界刺激因子诱导VSMC增殖，同时用构建好的大鼠miR－145重组慢病毒载体浸染目的细胞，CCK－8法检测细胞增殖情况，并在分子水平探讨miR－145是否通过抑制PDGF激活MAPK途径从而抑制VSMC增殖，从而为其抑制VSMC增殖的作用机制提供新的思路及实验依据。

1 材料与方法

1．1 材料 山西医科大学实验动物中心提供健康SD大鼠，体重110g～130g；DMEM细胞培养基、胎牛血清购自Hyclone公司；PDGF－BB购自美国PEPROTECH公司；CCK－8试剂购自碧云天公司；TRIzol、逆转录试剂盒、RT－PCR试剂盒均购自日本TaKaRa公司；引物设计与合成由上海吉玛公司完成；蛋白提取试剂盒购自北京普利莱公司；PVDF膜购自北京索莱宝公司；磷酸化ERK1／2和总ERK1／2抗体购自北京博奥森公司；磷酸化JNK和总JNK抗体、磷酸化p38MAPK和总p38MAPK抗体均购自美国Cell signaling technology公司；羊抗兔二抗购自Santa公司；marker购自富酶泰斯生物技术（深圳）有限公司；Ecl－plus发光试剂盒购自武汉博士德公司；其他试剂均系进口或国产分析纯。……