腹泻病人隐孢子虫及其他原虫感染粪样检测分析*
2012-01-24陈韶红田利光张永年童小妹陈家旭
陈韶红,艾 琳,田利光,张永年,童小妹,李 浩,陈家旭
肠道原虫是导致人体腹泻的主要原因之一。临床上引起腹泻的常见肠道原虫病有溶组织阿米巴病、隐孢子虫病、蓝氏贾第虫病等。但近年来,人群隐孢子虫的感染率正逐步上升,由隐孢子虫(cryptosporidium)引起的腹泻逐步增多,我国腹泻病人中隐孢子虫的感染率为0.32%~15.22%[1-2]。自1976年我国报道人隐孢子虫感染后,发现本病是引起旅游者腹泻和夏季腹泻的常见病原,多数表现为慢性腹泻,主要见于免疫功能缺陷者,特别是艾滋病患者中。现临床上检测粪便中隐孢子虫感染的病原学方法主要为改良抗酸染色法和荧光染色法[3-5]。随着免疫和分子检测技术的推广,免疫测定法和PCR技术在检测原虫感染上取得了很大的进展[6-9],本文将经典的传统的病原学检测的金标准,同时运用ELISA法、免疫试条法和FTA巢式PCR法,对临床109例腹泻病人进行隐孢子虫及其他原虫感染情况进行粪样检测分析,进而为该病的诊断、防治提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 主要试剂 0.9%生理盐水;2.5%碘液;改良抗酸染色试剂盒(珠海贝索生物技术有限公司BA-4091);金胺酚染色试剂盒(珠海贝索生物技术有限公司BA-4018);隐孢子虫粪抗原检测ELISA试剂盒(德国-R-Biopharm公司);隐孢子虫粪抗原快速检测条(德国-R-Biopharm 公司)。FTA 卡(Whatman公司);FTA 卡洗液 TE buffer(0.01mol/L Tris-HCl,pH 8.0;0.1mmol/L EDTA)(Whatman公司);2×TaqPCR Master Mix(0.1UTaq Polymerase/L、500mol/L dNTP、20mmol/L Tris-HCl (pH8.3)、100mmol/L KCl、3mmol/L MgCl2、其它稳定剂和增强剂)由上海生工生物制品有限公司提供;TAE电泳缓冲液(储备液50×),使用时稀释成(0.5×)即可。
1.2 主要仪器 PCR仪(美国ThermoPX2);凝胶分析成像系统(Bio-RAD公司 Quantity on 4.6.6);低温离心机(美国Thermo公司);……
