刘利则 夏 莉 刘玉侠 段北野 (吉林省人民医院，长春130021)

化疗是恶性肿瘤治疗的主要手段，但是在化疗过程中往往会出现肿瘤细胞对化疗药物的抗药性，影响治疗效果。针对这一问题，众多学者都在探讨能否用药物使这种耐药性逆转同时使肿瘤细胞恢复对药物的敏感性，保证治疗效果。目前研究证实，托瑞米芬(TOR)对多种耐药肿瘤细胞具有逆转和增敏作用［1，2］，本研究采用托瑞米芬联合顺铂(cDDP)对耐药细胞A549/cDDP进行逆转和增敏实验，为托瑞米芬治疗非小细胞肺癌耐药细胞提供理论依据。

1 材料与方法

1.1实验材料 肺癌耐药细胞株A549/cDDP：由本课题组建立，经大剂量cDDP冲击12次以后，MTT法检测耐药指数达4.2。枸橼酸托瑞米芬：上海拜力生物有限公司产品;顺铂(cDDP)：江苏豪森药业股份有限公司产品;IMDM培养基、MTT、DMSO：购自Sigma。Annexin V/PI双染色细胞凋亡检测试剂盒：购自碧云天公司。

1.2实验方法

1.2.1托瑞米芬(TOR)母液的配制 称取2.99 mg枸橼酸托瑞米芬，溶于5ml DMSO中，加5ml无血清 IMDM，混匀，即500 μmol/L。除菌，分装，常温密闭避光保存。

1.2.2 MTT法测定cDDP及cDDP+TOR联合用药对肺癌耐药细胞株A549/cDDP药物敏感性的影响复苏并培养A549/cDDP细胞至指数生长期，用0.25%胰蛋白酶消化，生理盐水洗涤，计数，用含体积分数10%胎牛血清的IMDM培养液配成浓度为5×104ml-1单个细胞悬液，接种于96孔培养板中，100 μl/well。置于 CO2培养箱中，37℃ 5%CO2，饱和湿度条件下静止培养过夜，倒置显微镜下观察可见细胞已贴壁，生长状态良好。将细胞分为3组：单独cDDP组终浓度分别是 200、100、50、20、10、5 μmol/L，cDDP+TOR(5 μmol/L)组及 cDDP+TOR(10 μmol/L)组。每个药物浓度设4复孔。同时设阴性对照(以等体积的无血清IMDM代之)、阳性对照(含1%DMSO)、TOR(5 μmol/L)对照和 TOR(10 μmol/L)对照。……