王凡平 王明永 杨建斌 赵东方 王红坡 邵 峰 孙瑞利 郭庆合 凌明智 赵永新宋士军 郭继强 (新乡医学院医学检验系，新乡453003)

甘露聚糖结合凝集素(Mannan-binding lectin，MBL)是由肝细胞分泌的血浆蛋白，为天然免疫系统中的关键分子［1］。近年来一些研究发现，MBL作为C型凝集素家族的重要成员和天然免疫中的关键分子，除了其固有的抗感染作用外，还发挥多种免疫调节作用［2-7］。陈月等［8］研究发现，MBL 能够诱导树突状细胞(Dendritic cell，DC)成熟，但机制并不明了。已报道，DC成熟过程中，模式识别受体Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)的表达发生改变;文献有报道，与MBL同为胶凝素家族成员的补体C1q能够通过核转录因子NF-κB信号途径诱导DC成熟［9］。MBL诱导DC成熟是否也与TLRs和NF-κB有关呢?需深入研究。

本研究以 TLRs和NF-κB为切入点，旨在初步探讨MBL诱导DC成熟机制。

1 材料与方法

1.1材料 人血浆天然MBL按文献［10］制备;rh-GM-CSF和rhIL-4购自Pepro-Tech公司。PE标记的鼠抗人CD1a、CD80及CD86单克隆抗体(mAb)，FITC标记的鼠抗人 CD83、CD86及 MHC-DR的mAb，同型 FITC-IgG1、PE-IgG1阴性参照抗体均为eBioscience公司产品。RPMI1640及尼龙毛柱购自Gibco公司;淋巴细胞分离液(Ficoll，密度1.077)为上海试剂二厂生产;新生牛血清(Newborn calf serum，NCS)购自杭州四季青生物工程材料研究所;鼠抗人 NF-κB mAb p65、抗 β-actin兔多克隆抗体及HRP-羊抗鼠IgG购自Sigma公司;鼠抗人MBL pAb购自R＆D公司;核蛋白提取试剂盒为Pierce公司产品，凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)测定试剂盒为Promega公司产品;［γ32-P］ATP为北京亚辉生物试剂公司产品;结合缓冲液：20 mmol/L Tris-HCl(pH8.0)、150 mmol/L NaCl、1 mmol/L CaCl2、2 mmol/L MgCl2、5 g/L BSA、1 g/L 叠氮钠;其它化学试剂均为进口或国产分析纯产品;FACSCalibur流式细胞仪为美国BD公司产品。

1.2方法

1.2.1人外周血Mo的获取 取健康成人志愿者的外周血，肝素抗凝后，用Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞。……