任宝永, 姜 鹏 崔玉琳, 姜进举,3, 秦 松

(1. 中国科学院 海洋研究所, 山东 青岛 266071; 2. 中国科学院 研究生院, 北京 100049; 3. 中国科学院烟台海岸带研究所, 山东 烟台 264003)

导入bar基因获得裙带菜草丁膦抗性配子体

任宝永1,2, 姜 鹏1, 崔玉琳1,2, 姜进举2,3, 秦 松1

(1. 中国科学院 海洋研究所, 山东 青岛 266071; 2. 中国科学院 研究生院, 北京 100049; 3. 中国科学院烟台海岸带研究所, 山东 烟台 264003)

裙带菜(Undaria pinnatifida)配子体经2.5 L气升式光生物反应器快速营养增殖, 通过基因枪法将携带草丁膦抗性基因(bar)的载体转入扩增后的配子体, 经草丁膦筛选, 获得抗性克隆。提取抗性克隆配子体基因组总DNA, 经PCR和PCR Southern检测, 结果显示60%的抗性克隆可检出bar基因, 表明bar基因是裙带菜配子体基因工程有效的筛选标记。

裙带菜(Undaria pinnatifida)配子体; 基因工程; 草丁膦抗性基因

裙带菜(Undaria pinnatifida)在中国已形成规模化栽培, 具有重要的经济价值。大型海藻的基因工程研究开始于20世纪90年代, 建立了以海带为材料的稳定表达系统[1-2]。裙带菜与海带同属海带目大型褐藻, 通过借鉴海带的经验, 于道展等[3]、秦松等[4]分别实现了lacZ报告基因在裙带菜孢子体中的瞬间表达和稳定表达, 证明基因枪法是适合裙带菜的有效导入方法, 通过在配子体阶段进行遗传操作, 在孢子体阶段进行表达是可行的技术路线, 但尚未发展有效的选择标记对转化子进行筛选。张亦陈等[5]、于道展等[6]开展了裙带菜配子体对不同筛选试剂的敏感性试验, 发现对草丁膦非常敏感, 提示草丁膦可作为裙带菜配子体遗传转化的筛选试剂。……