张 许 刘 卫

(1.泰山医学院，山东 泰安 271016； 2.中国人民解放军第八十八医院，山东 泰安 271000)

蝶酸是叶酸结构的一部分。曹曦元等[1]曾报道蝶酸能拮抗蓖麻毒素(Ricin)A链蛋白，常作为阳性对照药研究化合物拮抗蓖麻毒素A链蛋白的作用。蓖麻毒素A链蛋白具有很强的抑制蛋白质合成的功能，是一种生化武器，目前临床没有有效的解毒剂，而其原料获得和提取、纯化工艺都不复杂[2-3]。所以，研究蓖麻毒素解毒剂具有重要的现实意义。本研究利用叶酸水解实验制备得到蝶酸粗品，初步精制后建立其含量测定方法，为今后的实验提供原料。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 Lablliance高效液相色谱仪，Scientific System,Inc；配有二级阵列管UV6000LP型紫外检测器，Scientific System,Inc；BT124S型电子天平，北京多利斯仪器系统有限公司；甲醇为色谱纯；盐酸、冰醋酸、三乙胺、氨水均为分析纯；蝶酸对照品(≥93%)，购自Sigma公司；蝶酸供试品为本实验室用叶酸水解制得。

1.2叶酸水解试验

1.2.1试验原理 酰胺水解有两种方法，一是酸碱催化，在pH=3或者pH﹥13的条件下可以水解。二是用酰胺水解酶。本实验采用酸性条件下水解。

1.2.2试验步骤 叶酸45 g加蒸馏水300 ml，加HCl溶解成褐色澄清溶液，控制pH值3左右，搅拌加热至80～90℃，水解2.5 h。冷却至室温，抽滤得产物晾干，称重。将第一步水解产物溶于氨水，加少量活性炭煮沸10 min脱色，抽滤，滤液加HCl调pH值至弱酸性，冷却至室温。抽滤得产物，晾干。

1.3色谱条件 色谱柱：PhenomexneC18(250 mm×4.6 mm)，流动相甲醇︰水(含2%醋酸、0.2%三乙胺)为25︰75，流速1 ml/min。样品溶剂为0.375%氨水。波长：285 nm。

1.4对照品及样品制备 准确称取10 mg蝶酸对照品，用0.375%氨水溶解于50 ml容量瓶并定容至刻度，摇匀得0.2 mg/ml对照品。……