邹 军，霍生东

（1.甘肃省康县畜牧局，陇南 746500；2.西北民族大学生命科学与工程学院，兰州 730030）

最近几年，我国在生物技术和胚胎工程技术上有很大的进步，因而对胚胎的需求量越来越大，而卵母细胞的成熟发育能力与胚胎有着紧密的联系。所以在动物体外生产并保存大量优质的卵母细胞，对提高优良母畜的繁殖力非常重要。因此，完善未成熟卵母细胞体外成熟培养体系，提高它的体外成熟率极其重要。在卵母细胞的体外成熟过程中，参与成熟的因子较多［1-2］，激素是影响其成熟的重要因子。

hCG是动物下丘脑分泌的一类含氮类激素，分泌后先贮存在下丘脑内，机体在需要时才进入临近的毛细血管，运输到受体器官发挥作用。hCG的一个重要受体就是卵巢，卵巢主要的功能就是产生并使卵泡成熟。因此，预测hCG参与了卵母细胞的成熟。已有的研究表明，hCG可以提高人和狗卵母细胞的体外成熟率［3-4］，而对小鼠卵母细胞的成熟率没有影响［5］。因此，本试验主要通过改变培养液中hCG的浓度来改变未成熟卵母细胞的培养环境，探求hCG是否对绵羊卵母细胞体外成熟培养存在影响，为卵母细胞体外成熟的研究提供一定依据。

1 材料与方法

1.1 卵巢的采集与保存

从兰州屠宰场获取绵羊卵巢。方法是在绵羊屠宰剖腹后，立即无菌采取羊的卵巢，放于已准备好的装有含青、链霉素的生理盐水的保温瓶（35～37℃）中，4～5 h内带回实验室。

1.2 绵羊卵母细胞的采集

将运回到实验室的卵巢放在灭菌滤纸上，用灭菌好的手术器械将其表面多余的脂肪和组织去除掉，再用生理盐水清洗3次后，放在装有经培养箱平衡过夜处理的培养液的培养皿中，用机械切割法将其剪碎，然后放在二氧化碳培养箱中预培养35min，最后在显微镜下检卵。

1.3 卵母细胞的体外成熟培养

将采集到的COCs用洗卵液（成分:TCM199（GIBICO BRL.Lot No.1090233）+510 mmol/L NaHCO3+5.0 mmol/L Hepes+2%发情牛血清（OCS））清洗3～4遍，然后在基础成熟液（成分:TCM199（GIBICO BRL.Lot No.1090233）+10%FBS+0.22mg/L丙酮酸钠+25mmol/L Hepes+2.2g/L NaHCO3+100u/mL青霉素+100μg/mL链霉素）中清洗1～2遍，放于含有2 mL基础成熟液+hCG的培养皿中培养24h。

2 结果

由表1可知，卵母细胞经体外成熟24 h后，5、10、15 u/L hCG处理组的成熟率（45.16%、47.17%、48.05%）虽略低于对照组（52.49%），但均差异不显著（P＞0.05）；不同浓度hCG组间亦无显著差异（P＞0.05）。说明在体外成熟培养液中添加hCG不影响绵羊卵母细胞体外成熟。

表1 不同浓度hCG对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

图1 绵羊卵母细胞（A未成熟，B成熟）

3 分析与讨论

hCG全称是人绒毛膜促性腺激素，是一种含氮类的胎盘激素，由α和β两个亚基组成，产生于人妊娠后第7天子宫内膜滋养层细胞，主要生理作用是促进排卵及黄体的生成，以及促进睾丸间质细胞的发育，常用于催情，它的生理特性与LH类似［6］。

曾有人报道，若用hCG对未成熟卵母细胞进行前期预处理，就会使未成熟卵母细胞的发育潜力得到提高。但Ge等曾通过将卵母细胞直接放在装有含hCG的体外成熟培养液中进行成熟培养，结果得出对未成熟卵母细胞的体外成熟率没有显著改变，hCG并没有使它的成熟率提高［7］。本实验设置了1个空白对照组及低、中、高3个处理组，3个处理组中添加了不同浓度的hCG。将未成熟卵母细胞放在4个组中进行培养，在经过体外成熟培养24 h后，虽然3个处理组的卵母细胞成熟率略低于对照组，但其之间差异均不显著，而且3个处理组卵母细胞成熟率也没有显著差异。由此推断，hCG对绵羊卵母细胞体外成熟培养没有显著影响。

［1］霍生东，龙玲，阿依木古丽，等.光照及温度对小鼠卵母细胞体外成熟培养的影响［J］.贵州农业科学，2010，38（12）:170-171.

［2］蔡令波，王峰，顾熟琴，等.PMSG和hCG对猪卵母细胞体外成熟的影响［J］.畜牧与兽医，2002，34（12）:1-2.

［3］Lin Y H，W ang J L.Effect of FSH priming and hCG priming for on in vitro maturation of canine oocytes［J］.Human Report，2003，18：1632-1636.

［4］De los Reyes M，Lange J，Miranda P，et al.Effect of human chorionic gonadotrophin supplementation during different culture periods on in vitro maturation of canine oocytes［J］.Theriogenology，2005，64（1）:1-11.

［5］赵雁伟.LH和hCG对昆明小鼠卵母细胞体外成熟的影响［J］.中国比较医学杂志，2008，18（2）:23-27.

［6］赵兴绪.兽医产科学［M］.4 版.北京：中国农业出版社，2010：37.

［7］Ge H S，Huang X F,Zhang W，et al.Exposure to human chorionic gonadotropin during in vitro maturation does not improve the maturation rate and developmental potential of immature oocytes from patients with polycystic ovary syndrome［J］.Fertili Steril，2008，89（1）：98-103.