曲家华，周庆民，冯万宇

（黑龙江省兽医科学研究所，齐齐哈尔 161006）

乳房炎是危害世界奶牛业的主要因素之一。据报道，全世界约有2.2亿头奶牛，其中有1/3的奶牛患有乳房炎［1］，临床型乳房炎发病率仅2%～3%，而绝大部分是更为普遍的隐性乳房炎［2］。隐性乳房炎因无明显的临床症状，常不易被发现和重视。隐性乳房炎使泌乳奶牛每年的产奶量下降10%以上［3］，而且降低了牛奶品质，缩短了奶牛使用寿命，增加了后备奶牛的成本、额外劳力费用、药物开支和兽医服务费用，还延长产后发情和妊娠时间，给养殖户带来了重大的经济损失。因此，该病是当前畜牧兽医科技工作者一直关注的重点和研究的热点，尤其是隐性乳房炎病因复杂、隐蔽性强、不易被发现，更是棘手的难题。近年来，由于我国中草药资源丰富，且不易产生耐药性，毒副作用极小，还具有促进机体生长、增强免疫功能及提高机体抗病能力等特点，已成为研究热点。因此，笔者用纯中药制剂乳康健进行了治疗奶牛隐性乳房炎的效力试验。

1 材料

1.1 动物

某奶牛场经检测患有隐性奶牛乳房炎的奶牛。

1.2 饲料

TMR全混日粮。

1.3 药物

乳康健：将蒲公英、金银花、连翘、秦皮等药物精选，去杂质，干燥。采用粉碎机将原料药物加工成均匀的粉末，过筛，细度34～60目。确保加工制成的散剂干燥、疏松、色泽一致。按250 g/袋用塑料袋包装，用量为每头牛每天 1～2 袋，连用 7～10 d。

1.4 试剂与仪器

CMT 诊断液（SDS 7.5～12.5 g，NaOH 3.75 g，溴甲酚紫0.025 g，制成250 mL的溶液）；培养基：普通琼脂培养基，血琼脂培养基，伊红美蓝培养基，营养肉汤培养基，血清肉汤。95%酒精，革兰氏染液，生理盐水。

仪器：pH计，比重计，血细胞计数板，组织离心机，显微镜等。

2 方法

2.1 乳样的采集

无菌采集阳性奶牛的乳样，采样前先用温水清洗，然后用75%酒精棉球消毒乳区，弃去前三把乳汁，然后人工挤出乳样约10 mL置于灭菌青霉素小瓶中，4℃保存，2 h内接种培养。

2.2 乳汁pH值测定

pH计测定。

2.3 乳汁比重测定

将乳样倒入100 mL量筒中，置于平台上。将比重计轻轻放入量筒中，注意避免乳样溢出且比重计勿触及量筒壁。待其浮起而稳定不动，且液面无气泡时，然后视线保持和液面水平进行观察，读取与液面接触处的弯月面下缘最低点处的刻度值。

2.4 乳汁中氯化物含量测定

称取AgNO34.3 g，加适量无氯离子的蒸馏水，搅拌使其溶解，以250 m L容量瓶定容，充分摇匀，置于暗处备用。取被检乳样2.00 mL，放入锥形瓶中，加入K2CrO4指示剂1 mL，在剧烈摇动下用AgNO3标准溶液滴定至出现砖红色，并经摇动后砖红色仍不消失时为终点。记录所消耗标准溶液的体积，计算试样中氯的质量分数。

2.5 细菌鉴定

2.5.1 细菌的分离培养 将乳样接种到普通琼脂和鲜血琼脂培养基上培养24 h后取出观察，根据菌落的形态、大小、颜色等将菌落大致分类，然后根据细菌的形态、革兰氏染色特点仔细分类，排除环境中常在的无致病性细菌。将挑选出来的细菌做进一步纯培养，培养方法同上，链球菌用鲜血琼脂进行培养。纯培养后镜检无杂菌者保存于试管斜面培养基内。

2.5.2 葡萄球菌的分离培养 经无菌操作，分别进行直接分离培养（普通琼脂平板、普通琼脂血平板)和选择性分离培养（高盐甘露醇琼脂）。置37℃恒温箱培养24 h，观察菌落形态和溶血现象。对可疑单个菌落涂片、染色、镜检，进一步观察其在鉴别培养基上的生长情况，并纯化培养可疑菌落，保存备用。

2.5.3 葡萄球菌的鉴定 取已纯培养的菌种，分别接种血琼脂平板、普通琼脂平板、甘露醇、蕈糖等生化培养基，37℃培养18～24 h，置室温24 h，观察生长表现、溶血情况和色素变化；同时接种普通肉汤，37℃培养18～24 h后进行血浆凝固酶试验。

2.6 隐性乳房炎检测

用温水将乳房擦洗干净，后用0.2%新洁尔灭擦洗乳房，再用75%的酒精溶液消毒乳头，然后戴上灭菌手套进行人工挤乳，弃去前两把乳，将4个乳区的乳样挤到相应的乳汁检验盘中，倾斜检验盘60°，此时检验盘内剩余2 mL左右的乳汁，加入2 mL CMT诊断液，立即水平摇动检验盘，使乳汁与试剂充分混合，10 s后观察，判定标准见表 1。

表1 CMT法判定标准

2.7 乳康健对患牛乳汁中体细胞数的影响和隐性奶牛乳房炎的治疗作用

选取经CMT法测定为强阳性奶牛20头，分为2组，第1组为乳康健治疗I组（7头），供给量500 g/头，每天1次，连用7 d；第2组为乳康健治疗II组（7头），供给量250 g/头，每天1次，连用7 d；第3组为空白对照组（6头），正常饲喂，不给药。各组于试前用CMT法测定患牛乳汁中体细胞数，并于给药7 d后分别再用CMT法测定体细胞数，观察其变化。

表2和表3试验结果表明，不同剂量的药物给奶牛应用7 d后，奶牛阳性乳区均出现不同程度的转阴，乳区阳性率降低，但差异不显著（P＞0.05）。表明乳康健对隐性乳房炎有良好的治疗作用。

表2 乳康健对乳汁中体细胞数的影响

表3 乳康健对奶牛乳区阳性率的影响

3 结果与分析

3.1 pH值测定结果

测定结果见图1。

图1 pH值测定结果

3.2 乳汁比重测定结果

测定结果见图2。

图2 乳汁比重

3.3 乳汁中氯化物含量测定

结果见图3。

3.4 细菌学检查结果

3.4.1 病原菌的种类 在75个隐性乳房炎乳区中选取60个阳性反应（++）乳区，通过初步细菌分离试验结合显微镜检查发现，奶牛乳房炎主要致病菌有葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌及一些杂菌。

3.4.2 革兰氏染色葡萄球菌检测结果 结果见表4。

3.4.3 革兰氏染色链球菌检测 结果见表5。

表4 60个阳性乳区葡萄球菌检测结果

表5 60个阳性乳区链球菌检测结果

3.5 乳康健治疗结果

表6结果表明，用乳康健治疗奶牛隐性乳房炎后其乳汁中链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的阳性乳区数明显下降，其中链球菌阳性乳区数下降最明显，治疗有效率最高，达87.5%，其次是大肠杆菌。

表6 乳康健治疗前后奶牛乳汁中细菌消长情况

4 讨论

1）普查结果显示，本地区隐性乳房炎平均头阳性率53.1%；据报道，患隐性乳房炎乳区泌乳量可降低10%～15%［4］，乳汁中体细胞数越高，泌乳量减少得越多。

2）乳康健对奶牛隐性乳房炎的治愈率90%以上，而且疗程很短，用药5～7次就能基本痊愈，疗程6～8 d，平均6.5 d，优于临床常用的青、链霉素。该药不仅可提高泌乳量，而且还可降低乳汁中体细胞数，改善乳汁质量，证明其对奶牛隐性乳房炎有防治作用。

［1］李会，孙志文，汤树生，等.复方阿莫西林乳房注入剂治疗临床型奶牛乳房炎的疗效观察［J］.中国兽医杂志，2012（3）：71-74.

［2］高桂生，高光平，史秋梅，等.复方中药制剂“增乳健牛散”对奶牛隐性乳房炎主要病原菌的药敏试验［J］.畜牧与饲料科学,2012（2）:8-9.

［3］Katja K，Fiona C，Flynn J，et a1.Intramammary-infusion of alive culture of lactococcus lactis for treatment of bovine mastitis：comparison with antibiotic treatment in field trials［J］.Dairy Research，2008，75：365-373.

［4］Muzaffar H，Christof V E.Cap gene as novel target for specific identification of staphylococcus aureus［J］.Clini Microbio，2008，46（2）：470-476.