冯立芳, 畅 悦, 袁冬霞 缪 炜

(1. 中国科学院水生生物研究所 水生生物多样性与保护重点实验室, 湖北 武汉 430072;

2. 浙江工商大学 食品与生物工程学院, 浙江 杭州 310012; 3. 中国科学院研究生院, 北京 100049)

嗜热四膜虫五个hsp70基因的表达分析

冯立芳1,2, 畅 悦1,3, 袁冬霞1, 缪 炜1,*

(1. 中国科学院水生生物研究所 水生生物多样性与保护重点实验室, 湖北 武汉 430072;

2. 浙江工商大学 食品与生物工程学院, 浙江 杭州 310012; 3. 中国科学院研究生院, 北京 100049)

鉴定得到嗜热四膜虫13个含有完整保守结构域的hsp70基因, 对其中5个高度相似且无内含子的hsp70基因进行表达分析。在37 、39 和41 ℃热激条件下, 实时荧光定量PCR结果表明,hsp70-2基因对热激响应最敏感。在四膜虫生长、饥饿和接合生殖这3种生理或发育状态下, Microarray结果显示,hsp70-4基因恒定且高表达; 在热激条件下,hsp70-4基因的表达水平随着温度的升高而略微增加, 证实hsp70-4基因为热休克相关蛋白hsc70基因;克隆的hsp70-4基因全长2 208 bp, 开放阅读框长1 959 bp, 编码653个氨基酸。Microarray结果提示,hsp70-3可能参与四膜虫饥饿早期(0～12 h)的耐受和接合生殖后期(6～10 h)的新大小核形成, 老大核凋亡等事件;hsp70-5可能参与四膜虫饥饿晚期(12～15 h)的耐受和接合生殖早期(0～6 h)的小核减数分裂、小核交换和原核(pronuclear)融合事件。Blast2GO分析表明, 与hsp70-3和hsp70-5共表达的基因分别参与不同的生物学过程, 进一步反映了hsp70-3和hsp70-5这两个基因在功能上是存在差异的。

嗜热四膜虫;hsp70基因; 实时荧光定量PCR; Microarray; RACE; 表达分析

热休克蛋白(heat-shock protein, HSP)是生物适应环境变化的一个重要媒介分子, 温度、外源有毒化合物、紫外辐射等都……