乐 亮， 李晶洁， 黎仕锋， 朱文博， 束敏峰， 苏兴文， 邱鹏新， 颜光美

(中山大学中山医学院药理学教研室，广东 广州510082)

帕金森病(Parkinson diseases，PD)是一种常见的慢性神经系统性疾病。PD 以运动减少、肌张力强直和震颤为主要症状;以中脑黑质致密区多巴胺能神经元进行性缺失并伴有Lewy 小体生成为主要病理特征［1－3］。长期以来，研究者针对神经元的坏死和凋亡，期望开发一种有效的神经保护剂。近几年来，人们发现四环素的衍生物－ 米诺环素(minocycline)具有显著的抗炎、抗凋亡和抗氧化等作用，可能成为一种有效的多巴胺能神经元的保护剂［4－6］。本实验以PC12 细胞为多巴胺能神经元模型，观察米诺环素对1－甲基－4－苯基吡啶离子(1－methyl－4－phenylpyridinium ion，MPP+)诱导的PC12 细胞的线粒体功能损伤的保护作用，为米诺环素应用于PD的临床治疗提供理论基础。

材 料 和 方 法

1 PC12 细胞培养及诱导分化

PC12 细胞(由中山大学中山医学院药理教研室提供)置于含10%马血清(Gibco)和5%胎牛血清(Gibco)、1 ×105U/L 青霉素和100 mg/L 链霉素的RMPI－1640(Gibco)培养基中，37 ℃、5%CO2细胞培养箱培养。

传代的PC12 细胞加入100 μg/L NGF，并培养在含胶原蛋白铺板的细胞板内，经7－8 d 的诱导分化，长出突触，用于实验。诱导分化后的PC12 细胞分别先用终浓度为0、0.01、0.1、1、10 μmol/L minocycline预处理30 min，然后加入0.5 mmol/L 的MPP+，再置于37 ℃、5%CO2细胞培养箱培养24 h，用于实验。

2 甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法检测细胞活性

PC12 细胞按密度为1 ×108cells/L、100 μL/well接种于96 孔板。经诱导分化并给药处理后，每孔加入5 g/L MTT(Sigma)溶液20 μL。37 ℃、5%CO2细胞培养箱放置4 h 后弃去培养基，加入二甲基亚砜(Sigma)100 μL。振荡10 min 后，用酶标仪(BioTek，Burlington，VT)在570 nm 波长处测定各孔的吸光度值(A值)。最后按公式:细胞的存活率=(给药组A 值/对照组A 值)×100%计算得出各组的细胞生存率。……