文先杰， 徐世元， 雷洪伊， 梁 桦， 郑雪琴， 杨承祥

(1 南方医科大学珠江医院麻醉科，广东 广州510282;2 佛山市第一人民医院麻醉科，广东 佛山528000)

局麻药在临床常用浓度下也可导致神经细胞毒性损伤，表现为神经细胞的肿胀、退行性变，神经脱髓鞘、空泡症、染色体溶解、细胞程序性死亡等。暂时性神经病学综合征(transient neurological syndrome，TNS)和马尾综合征是临床上常见局麻药神经毒性反应［1］。SH－SY5Y 细胞株来源于人神经母细胞瘤，该细胞繁殖快，细胞形态、生理和系列化功能与正常神经细胞相似，因此该细胞是进行人类神经细胞研究较为理想的一种细胞模型［2］。本研究在SH－SY5Y 细胞体外培养的基础上，采用MTT 法和流式细胞仪技术，观察了不同浓度利多卡因对SH－SY5Y 细胞活力及细胞凋亡的影响，初步探讨利多卡因的神经毒性损伤作用。

材 料 和 方 法

1 材料

盐酸利多卡因标准品购自中国食品药品检定研究院，噻唑蓝(MTT)购自中国医药(集团)上海公司，Annexin V－FITC 细胞凋亡检测试剂盒购自BIPEC，SH－SY5Y 细胞株(中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)。主要仪器包括全自动酶标仪(雷勃公司)，分光光度计(GBC)，流式细胞仪(BD)等。

2 方法

2.1 SH－SY5Y 细胞培养 将细胞培养于DMEM 培养液内(含有4.0 mmol/L 谷氨酰胺、4.5 g/L 的葡萄糖、100 mg/L 链霉素和100 U/L 青霉素)，置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养，待细胞生长至约90%时用于实验。

2.2 实验分组与处理 实验分为4 组，即:正常培养组(对照组，未经药物处理);0.5%、1%、2%利多卡因组(L1、L2、L3 组，相当于18.5 mmol/L、37 mmol/L、74 mmol/L 利多卡因处理细胞):分别用相应浓度的利多卡因处理SH－SY5Y 细胞10 min。

2.3 观察指标

①SH－SY5Y 细胞形态学观察 药物处理10 min 后，在可见光显微镜下观察细胞形态，评价细胞受损情况。……