徐远玲，张旭东，马宏宝#

1)郑州大学生物工程系郑州 450001 2)郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州 450052

#通讯作者，男，1957年4生，博士，教授，研究方向:生物化学，E-mail:mahongbao@zzu.edu.cn

腺病毒载体左侧反向末端重复区对下游基因表达特异性的影响

徐远玲1)，张旭东2)，马宏宝1)#

1)郑州大学生物工程系郑州 450001 2)郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州 450052

#通讯作者，男，1957年4生，博士，教授，研究方向:生物化学，E-mail:mahongbao@zzu.edu.cn

腺病毒;左侧反向末端重复区;绿色荧光蛋白

目的:研究腺病毒载体左侧反向末端重复区(ITR)对下游基因表达特异性的影响。方法:采用分子生物学方法及Gateway技术构建正反2个方向含有人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子及GFP报告基因的重组腺病毒载体。以含CMV启动子及GFP报告基因的重组腺病毒载体和不含任何启动子只含GFP报告基因的重组腺病毒载体作对照。重组腺病毒质粒经PacⅠ线性化后用脂质体转染法转染293A细胞，包装并扩增出重组腺病毒颗粒，TCID50测得滴度后分别以相同的感染复数感染4种肿瘤细胞，观察荧光表达情况。结果:携带正向和反向hTERT启动子的重组腺病毒载体在各细胞中荧光表达量无差异，无启动子的重组载体在腺病毒增殖比较强的细胞中有微弱荧光表达。结论:重组腺病毒左侧ITR能够影响上下游特异启动子及其调控基因表达，但对上下游基因的影响程度无明显差异，并且左侧ITR具有类启动子功能。

近年来，重组腺病毒载体逐渐成为目前应用最广泛的基因治疗载体之一。人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)在90%以上肿瘤细胞中的活性是增高的，而在绝大多数体细胞中无活性，因此hTERT启动子常作为肿瘤特异性启动子应用于条件复制型腺病毒来进行基因治疗的研究［1］。……