吴汉东

（辽宁医学院，辽宁 锦州 121001）

腐败蛋黄卵磷脂的提取

吴汉东

（辽宁医学院，辽宁 锦州 121001）

对腐败蛋黄卵磷脂的提取工艺进行初步探讨。结果表明，用95%乙醇提取3次获得约含18.5%卵磷脂的粗品卵磷脂，使用5%ZnCl2纯化粗卵磷脂后的回收率约为85.4%，含量达96.8%。薄层色谱分析结果显示自制的卵磷脂与卵磷脂样品Rf值一致。

腐败蛋黄；卵磷脂；有机溶剂；沉淀剂；提取

卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”，广泛应用于食品、医药、化工等诸多领域。其来源主要从大豆、动物肝脏和蛋黄中提取。由于蛋黄卵磷脂中磷脂酰胆碱的含量高，富含饱和脂肪酸，具有更强的氧化稳定性而备受关注。

目前，国内外对蛋黄卵磷脂的研究主要是针对新鲜蛋，对于腐败蛋黄卵磷脂的提取很少涉及。在综合国内外文献基础上[1-4]，通过对腐败蛋黄卵磷脂的提取工艺进行初步探讨，希望寻找一条适合制备腐败蛋黄卵磷脂的可行方法。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器

腐败蛋由辽宁医学院鸡场提供；95%乙醇、丙酮、正己烷、氯仿、甲醇、钼酸铵、硫酸铜等试剂均为分析纯；硅胶GF254、羧甲基纤维素钠、卵磷脂标准品等：购自Sigma公司。

UV-1800紫外-可见光分光光度计：北京瑞利分析仪器公司；RE52-98旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；DZF-6020MBE真空干燥箱：上海博迅实业有限公司；KH-2000型双波长薄层色谱扫描仪、TD-II型全自动薄层铺板机：上海科哲生化科技有限公司；JB50-D强力电动搅拌机：上海圣科仪器设备有限公司。

1.2 卵磷脂提取方法

分离腐败蛋黄10 g，烘干（100℃，4 h）。在蛋黄中加入一定量的95%乙醇，搅拌均匀，2000 r/min离心10 min，收集上清液。向沉淀物加入95%乙醇，重复以上步骤多次。将收集到的上清液减压蒸馏至近干，用少量正己烷溶解，于正己烷溶液中加入冰丙酮（4℃），分离出沉淀物，真空干燥，得淡黄色的粗品卵磷脂。

将粗品卵磷脂溶于无水乙醇中，制成10%的卵磷脂乙醇溶液。再加入适量的ZnCl2的水溶液，室温搅拌，生成卵磷脂ZnCl2配合物沉淀，离心后分离沉淀并加适量冰丙酮洗涤，收集沉淀物，真空干燥，得白色的精制卵磷脂。

1.3 卵磷脂含量的测定

采用钼酸铵定磷法[6]测定含磷量，间接反映卵磷脂的含量。

1.4 薄层色谱分析

将制备的卵磷脂样品与标准品分别配成2%氯仿溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿:甲醇:水（60:35:4）为展开剂，层析结束后，取出晾干。再喷10%硫酸铜溶液，热风吹干，170℃干燥10 min显色。

2 结果与讨论

蛋黄由51.6%水分，16%蛋白质，7%磷脂（主要为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺）,25.4%中性脂（主要为甘油三脂、胆固醇）所构成，其中磷脂占总脂类的21.6%（此数据因不同鸡种和饲养方法而不同）[5]。有机溶剂法提取卵磷脂主要有2种方案，一种是先除去中性脂，再分离卵磷脂和蛋白质；另一种是先除去蛋白质，再分离卵磷脂和中性脂。本试验在前期试验的基础上，利用乙醇和正己烷将蛋黄中脂类物质提取出来，除去蛋白质等物质。然后利用卵磷脂不溶于丙酮的性质，将卵磷脂与其它脂质和胆固醇分离开来。在进行有机溶剂提取时，必须控制好溶剂浓度、溶剂用量、提取的温度、次数、时间等条件。

2.1 溶剂用量的选择

蛋黄中分别加入 5、10、15、20 mL/g的 95%乙醇室温条件下进行提取。如图1所示，在一定范围内，卵磷脂的提取率随乙醇用量的加大而增加。从工艺流程和经济两方面考虑，乙醇用量应选取10 mL/g左右为佳。

图1 乙醇用量对提取率的影响Fig.1 Ethanol content on extraction rate

2.2 提取次数的选择

选用乙醇加入量为10 mL/g方案重复提取蛋黄得到4批粗品卵磷脂，测定其含磷量。如图2所示，第3、第4次提取的粗品卵磷脂含磷量较高，分别有3.38%、3.43%。所以提取3次为宜。

2.3 沉淀剂用量的选择

图2 提取次数对含磷量的影响Fig.2 Extraction times on the content of phosphorus

利用ZnCl2和卵磷脂形成配合物沉淀将卵磷脂从有机溶剂中分离出来，并除去蛋白质、脂肪等杂质。加入相当于卵磷脂质量的1%、5%、10%、15%、20%ZnCl2的水溶液，室温下搅拌0.5 h，离心收集沉淀物。加入冰丙酮反复洗涤，收集沉淀物，干燥后称重。如图3所示，5%ZnCl2回收卵磷脂效果最佳，回收率约为85.4%。

图3 氯化锌含量对回收率的影响Fig.3 Content on the recovery of zinc chloride

2.4 薄层色谱分析

如图4所示，自制粗品卵磷脂、纯化卵磷脂经薄层色谱分析后均有2个明显的斑点，Rf值分别为0.40、0.86。与卵磷脂样品 Rf值一致。

图4 自制纯化卵磷脂及对比Fig.4 Self-purification of lecithin and Comparison

3 结论

有研究表明，我国禽蛋因保鲜不当的损失占总产量的15%左右，如何充分利用这部分资源，变废为宝成为禽蛋生产消费领域需要解决的问题。本试验使用有机溶剂从腐败蛋黄中提取卵磷脂、利用无机盐沉淀纯化卵磷脂，研究结果表明，在蛋黄中加入95%乙醇（10 mL/g）提取3次效果最佳，制得约含18.5%卵磷脂的粗品卵磷脂；将获得的粗品卵磷脂溶于乙醇后，用5%ZnCl2纯化的回收率约为85.4%，卵磷脂含量达96.8%；薄层色谱分析结果显示自制的卵磷脂与卵磷脂样品Rf值一致。

本试验方法操作简单、成本低且提取效率高，为提取腐败蛋黄卵磷脂的可行方法。但可能由于蛋白质变性的缘故，卵磷脂的提取效率还是低于新鲜蛋。所以，对于腐败蛋黄卵磷脂的提取工艺还需进一步研究。

[1]吴晓英，林影，叶倩君，等.蛋黄卵磷脂的制备研究[J].食品科学,2004,25(5):115-118

[2]姚茂君，黄群，麻成金，等.超声波、微波辅助萃取鹌鹑蛋黄卵磷脂的研究[J].食品与发酵工业,2007,33(5):148-152

[3]黄金枝，林松毅，宫新统，等.均匀设计法优化蛋黄卵磷脂提取工艺的研究[J].食品科学,2008,29(10):257-259

[4]A Shah,C C Akoh,R T Toledo,et al.Isolation of a phospholipid fraction from inedible egg[J].J of Supercritical Fluids，2004，30:303-313

[5]Luz E.palacios,Tong wang.Extraction of egg-yolk lecithin[J].J of the American Oil Chemists'Society，2005,82(8):565-569

[6]国家药典委员会.中国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，1995：附录ⅣB

Extraction of Lecithin from Inedible Egg Yolk

WU Han-dong
（Liaoning Medical University，Jinzhou 121001，Liaoning,China）

The extraction of lecithin from inedible egg yolk were discussed in this paper.The 18.5%rough lecithin from inedible egg yolk was extract three times with 95%ethanol under different conditions and precipitated by acetone.5%ZnCl2precipitator was used to purify rough lecithin further.About 85.4%recovery of refined lecithin was obtained,with the content of phospholipids over 96.8%.The TLC results showed that the self-preparation lecithin had two clear spots,consistent with the products.

inedible egg yolk;lecithin;organic solvent;salt precipitation;extraction

吴汉东（1975—），男（汉），讲师，硕士，研究方向：畜产品加工。

2010-08-07