王 芳，何 吉，朱发明，刘晋辉，秦 斐，陈 舒，徐 罡，吕行军，严力行

浙江省血液中心 血液安全研究卫生部重点实验室，杭州 310006

·论著·

应用Solexa技术检测脐血CD34+细胞体外诱导的巨核细胞mRNA表达

王 芳，何 吉，朱发明，刘晋辉，秦 斐，陈 舒，徐 罡，吕行军，严力行

浙江省血液中心 血液安全研究卫生部重点实验室，杭州 310006

目的应用Solexa技术研究人脐带血CD34+细胞体外诱导巨核细胞的mRNA表达。方法采用密度梯度离心法和免疫磁珠分选系统获取人脐带血CD34+细胞。100 ng/ml 促血小板生成素诱导培养12 d后，应用抗CD41+单克隆抗体免疫磁珠法分选获得巨核细胞和非巨核细胞。应用Solexa技术检测巨核细胞和非巨核细胞的mRNA表达差异。结果获取的Tag初始数量巨核细胞和非巨核细胞分别为 3 773 147 和 3 533 805 个。整个清晰的Tag数量分别为 3 291 132和 2 967 947 个，明显独特的tag数量分别为 197 769 和 245 318 个。其中上调基因表达数量为1161个，下调为902个。上调Tag表达数量为2717个，下调为1519个。结论巨核细胞和非巨核细胞 mRNA表达存在显著差异，差异基因编码产物与细胞发育、黏附、凋亡、代谢、细胞内及细胞间的信号转导以及免疫应答等功能相关，进一步深入将有助于探讨巨核细胞的表达机制、信号传导及调控机制。

巨核细胞；mRNA表达；体外扩增；Solexa测序

造血干细胞分化成巨核细胞进而产生血小板，涉及到巨核细胞系各期细胞的形成、血小板的入胞和出胞等，是一个复杂的过程，到目前为止其分子机制仍不明确。本研究采用人脐血干细胞体外促血小板生成素(thrombopoietin, TPO)诱导扩增分化为巨核细胞，应用Solexa测序技术检测巨核细胞和非巨核细胞的mRNA表达差异，探讨巨核细胞的表达机制、信号传导及调控机制。……