李 霞，刘霭珊，徐来祥，赵亚华

(1 华南农业大学生命科学学院，广东广州 510642;2 曲阜师范大学生命科学学院，山东曲阜 273165）

哺乳动物防御素具有广泛的抗性谱，可以抗细菌、真菌、被膜病毒，甚至对支原体、衣原体、螺旋体及肿瘤细胞和爱滋病病毒也有杀伤作用［1-2］.此外，防御素还可启动获得性免疫系统，因此越来越受到人们的关注.哺乳动物的免疫系统包括特异性和非特异性免疫.非特异性免疫对各种入侵机体内的微生物在最初反应中起关键作用，哺乳动物防御素(Defensins)是其非特异性免疫的主要成分，存在于多形核粒细胞和上皮组织内，如人、大鼠、豚鼠、兔的嗜中性粒细胞及人和小鼠的小肠潘氏细胞内［3］.防御素富含Cys，在分子内形成二硫键，根据其分子内二硫键的连接位置不同可分为α-防御素和β-防御素［4］.α-防御素由 29 ～36 个氨基酸(aa)组成，分子内含6个保守半胱氨酸形成的3对二硫键，连接位点分别为 Cys1-Cys6、Cys2-Cys4 和 Cys3-Cys5［5］.二硫键可使小分子防御素分子致密以防蛋白酶水解，致使防御素在吞噬溶酶体环境中能保持活性.在兔中性粒细胞(Rabbit neutrophil peptide，NP)中分离到6种 α-防御素的阳离子抗菌肽:NP-1、NP-2、NP-3a、NP-3b、NP-4、NP-5，长度均约 32-34 个 aa，富含 Cys和Ary，每种防御素都含3个分子内二硫键.比对它们的aa组成，其序列高度保守，对其生物学活性及结构有重要的作用.2003年徐文生等［6］对NP-1进行过原核表达，表达量占细菌总蛋白的34.7%.本研究采用毕赤酵母Pichia pastoris表达系统对pNP-1基因及其串联基因进行表达，表达出的多价串联体的重组蛋白经溴化氰切割，将得……