景明，罗永皎，李硕，李成义

（甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000）

质量标准

不同产地藏药材湿生扁蕾中活性成分含量的研究△

景明*，罗永皎，李硕，李成义

（甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000）

目的：通过测定不同产地、不同采收时期湿生扁蕾中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的含量，考察湿生扁蕾的最佳采收期与最佳产地。方法：用RP-HPLC法，样品直接用70%乙醇提取进样，ZORBAXSB-C18柱，检测波长为260nm，柱温30℃，甲醇-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱，流速1mL·min－1。分析了甘肃15个不同产地湿生扁蕾药材中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的含量。结果：15个不同产地湿生扁蕾药材中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的含量差别较大，其中木犀草素最高为1.79 mg·g－1，最低为0.24 mg·g－1，1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮最高为0.68 mg·g－1，最低为0.13 mg·g－1。结论：同一产地以8月份采收的湿生扁蕾中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的含量最高；甘肃15个产地中以临潭县下拉地村产湿生扁蕾中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的含量最高。

湿生扁蕾；含量测定；反相高效液相色谱

湿生扁蕾为龙胆科扁蕾属植物Gentianopsis paludosa（Munro）Ma.的干燥全草，藏药称机合斗，产于甘肃、青海、四川、西藏等地区，生长在海拔2300～4100 m的河滩草地、沟边、山坡。具有清热解毒、健脾止泻等功能，藏医用全草治疗肝炎、胆囊炎、热病发斑、目赤肿痛、消化不良、肠胃炎等［1］。所含的化学成分包括黄酮类、酮类、三萜类、三十烷醇、胡萝卜苷及β-谷甾醇，还含有酚类、有机酸等［2-3］，其中酮类、黄酮类具有抗炎、镇痛、解热、抗腹泻作用［4-5］。《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药分册》中收载了湿生扁蕾药材，但其质量标准中未制定含量测定指标。本实验拟采用RP-HPLC测定藏药湿生扁蕾中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的含量，对不同产地、不同采收期湿生扁蕾中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的含量作一比较，为该药材的质量评价提供参考依据。

1 仪器与试药

Agilent HP1200高效液相色谱仪（美国安捷伦）；ZORBAXSB-C18色谱柱 （美国安捷伦）；AE-240电子天平（梅特勒－托利多仪器上海分公司）；KQ-100超声波清洗器（昆山市超声技术有限公司）；R-200旋转蒸发仪（瑞士布奇）。甲醇（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）；磷酸（分析纯，白银良友化学试剂有限公司）；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

木犀草素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111520-200201），1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮对照品（自提，HPLC归一化法测定纯度达98%以上）。湿生扁蕾药材采自甘肃15个不同产区，经甘肃省药品检验所中药室宋平顺主任中药师鉴定为湿生扁蕾。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ZORBAXSB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；柱温：30℃；流速：1mL·min－1；进样量：10μL；检测波长：260nm；流动相：甲醇（A）-0.4%磷酸水溶液（B）梯度洗脱（0～15min，A∶B＝35∶65，15～60min，A∶B＝60∶40）；记录时间为60min。理论塔板数均大于3000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取木犀草素对照品5.4 mg、1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮对照品4.3 mg，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取1mL，用甲醇定容至5mL量瓶中，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取不同产地、不同采收期湿生扁蕾药材的干燥粉末（60目）1.0 g，置于50mL量瓶中，加入70%乙醇40mL，超声处理20min，放冷，用70%乙醇定容至50mL，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察

精密吸取混合对照品溶液2，4，8，10，12，16，18，20μL，进样测定，以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的回归方程分别为：Y＝84.526X－49.163（r＝0.9994），Y＝112.431X－117.129（r＝0.9991）。结果木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮分别在0.216～2.16μg和0.172～1.72μg线性良好。

2.5 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液10μL，按上述色谱条件，重复进样5次，木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的RSD分别为1.03%和0.97%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0，2，4，6，8，12 h各进样 10μL，木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的RSD分别为1.09%和1.21%，表明样品溶液在12 h内稳定。

2.7 重复性试验

精密称取同一批湿生扁蕾药材1.0 g，共5份，分别按2.3项下方法制备样品溶液，按2.1项下色谱条件，各取10μL进样测定，木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的RSD分别为1.71%和1.36%。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的湿生扁蕾药材（木犀草素含量：1.79 mg·g－1，1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮含量：0.68 mg·g－1）0.5 g，共5份，每份精密加入一定量的木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮对照品，按2.3项下方法制备样品溶液，依法测定含量，计算回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定

取不同产地、同一产地（甘肃临潭县下拉地村）不同采收期湿生扁蕾药材样品，按2.3项下方法制备样品溶液，分别精密吸取10μL，按上述色谱条件测定，计算含量，结果见表2、表3及图1、图2。

表1 加样回收率试验

表2 不同产地湿生扁蕾中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的质量分数 ／mg·g－1

表2 不同产地湿生扁蕾中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的质量分数 ／mg·g－1

产地 采收日期／年-月-日 木犀草素 1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮2008-07-22 1.48 0.57甘肃临潭县下拉地村 2008-07-22 1.79 0.68甘肃卓尼县上卓村 2008-07-22 0.93 0.33甘肃卓尼县口子下村 2008-07-22 1.15 0.41甘肃卓尼县刹地沟村 2008-07-22 1.54 0.69甘肃临潭县江果河村 2008-07-23 1.21 0.46甘肃合作市多合寺村 2008-07-23 0.91 0.37甘肃合作市德乌鲁村 2008-07-25 1.10 0.42甘肃合作市上上加寺村 2008-07-25 0.77 0.29甘肃合作市日多马村 2008-07-25 1.33 0.51甘肃碌曲县科才沟口村 2008-07-27 1.24 0.46甘肃碌曲县唐龙多村 2008-07-27 0.96 0.35甘肃夏河县洛赤霍纳尕村 2008-07-28 0.78 0.27甘肃夏河县观音大庄村 2008-07-28 1.11 0.44甘肃夏河县甘加贡玛村甘肃临潭县冶力关村2008-07-28 0.24 0.13

表3 不同采收期湿生扁蕾中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的质量分数／mg·g－1

表3 不同采收期湿生扁蕾中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的质量分数／mg·g－1

采收日期／年-月-日 木犀草素 1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮2009-07-14 1.03 0.392009-07-20 1.26 0.472009-07-28 1.59 0.622009-08-07 1.64 0.652009-08-15 1.66 0.642009-08-24 1.53 0.602009-09-03 1.42 0.572009-09-15 1.40 0.522009-09-22 1.38 0.472009-10-04 1.33 0.442009-11-09 1.35 0.412009-12-07 1.30 0.39

图1 木犀草素及1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮对照品HPLC图

图2 湿生扁蕾样品HPLC图

3 讨论

实验曾考察了乙腈－水、甲醇－水、甲醇－0.4%磷酸水溶液为流动相的梯度洗脱系统，结果以甲醇－0.4%磷酸水溶液为流动相线性梯度洗脱，木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮峰可以达到基线分离，峰形对称，分离度好。同时对检测波长进行了选择，通过比较254，260，270，280nm检测波长下的色谱图，发现检测波长为260nm时，色谱峰最高。

实验中还曾对超声与热回流进行比较，结果两种提取方法提取物的含量相当。同时对提取溶剂甲醇、70%甲醇水溶液、无水乙醇、70%乙醇水溶液进行考察，结果以70%乙醇提取物的含量最高。对超声提取时间10，20，30，40min的考察表明，70%乙醇超声20min提取基本完全，故采用70%乙醇超声提取20min。

实验结果表明，甘肃15个不同产地湿生扁蕾全草中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的含量差别较大，其中木犀草素最高为1.79 mg·g－1（甘肃临潭县下拉地村），最低为0.24 mg·g－1（甘肃夏河县甘加贡玛村），1，7-二羟基-3，8-二甲氧基口山酮最高为0.68 mg·g－1（甘肃临潭县下拉地村），最低为0.13 mg·g－1（甘肃夏河县甘加贡玛村）；而且同为甘南地区不同县村之间也有较大差异。分析影响本实验结果的因素可能是生态环境（光照、气候、土壤等）和采收期的不同所致。

本方法简便、准确、重复性好，可以作为控制湿生扁蕾药材质量的方法之一；不同产地的湿生扁蕾中木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的含量差别较大，有必要进行最佳产地的优选和不同采收期的含量比较研究。

［1］张宝琛，甄润德，胡柏林，等.湿生扁蕾的化学成分研究［J］.中草药，1980，11（4）：149.

［2］李作平，霍长虹，郑小莉.扁蕾的化学成分研究［J］.中国现代应用药学杂志，2003，20（1）：24.

［3］王焕弟，谭成玉，杜昱光，等.藏药湿生扁蕾的化学成分研究［J］.中国药学杂志，2005，40（14）：1059.

［4］王焕弟，谭成玉，白雪芳，等.藏药湿生扁蕾有效成分抑菌作用初探［J］.天然产物研究与开发，2005，17（5）：598-599.

［5］米琴，曹长年，赵宙光，等.藏药湿生扁蕾有效成分的研究［J］.青海师范大学学报（自然科学版），2005，23（2）：64.

Research of Active Ingredient Content in Gentianopsis Paludosa From Different Places

JING ming，LUO Yong-jiao，LIShuo，LI Cheng-yi
（Gansu college of TCM，Lanzhou 730000，China）

Objective：To identify the optimal harvest time and area of Gentianopsis paludosa（Mum.）Ma，the contents of luteolin and 1，7-dihydroxy-3，8-dimethoxyxanthone of Gentianopsis paludosa（Mum.）Ma from different areas and different harvest phases were determined.MethodsRP-HPLC method was used ZORBAXSB-C18column was applied.The detection wavelength was set at260nm.The column temperature at 30℃.Themobile phase consisted of methonal-0.4%phosphoric acid solution in a gradient elution mode at 1mL·min－1。The content of luteolin and 1，7-dihydroxy-3，8-dimethoxyxanthone of Gentianopsis paludosa（Mum.）Ma from 15 different areas of Gansu were analysed.Results：The contents of luteolin and 1，7-dihydroxy-3，8-dimethoxyxanthone of Gentianopsispaludosa（Mum.）Ma from 15 different areaswere significantly different.Luteolin，the highestwas 1.79 mg·g－1and the lowestwas0.24 mg·g－1.1，7-dihydroxy-3，8-dimethoxyxanthone，the highestwas0.68mg·g－1and the lowestwas0.13mg·g－1.Conclusion：From the same place，the luteolin and 1，7-dihydroxy-3，8-dimethoxyxanthone of Gentianopsis paludosa（Mum.）Ma gathered at August have the highest content.15 different areas of Gansu，the luteolin and 1，7-dihydroxy-3，8-dimethoxyxanthone of Gentianopsis paludosa（Mum.）Ma from Xialadi village in Lintan county were the highest.

Gentianopsis paludosa（Mum.）Ma；Content determination；RP-HPLC

甘肃省科技支撑计划项目（0804NKCA119-08）；甘肃省中医药科研项目（07-CZK-50）；兰州市科技计划项目（2008-1-172）

*景明，Tel：（0931）8765459，E-mail：jm＠gszy.edu.cn

2010-11-22）