郑州韩都药业集团有限公司 袁锐利

辅仁药业集团有限公司 丁红强

HPLC法测定银翘解毒丸中绿原酸的含量

郑州韩都药业集团有限公司 袁锐利

辅仁药业集团有限公司 丁红强

银翘解毒丸是由金银花和连翘制成的丸剂，具有清热、解毒、消炎的功能。用于急慢性咽炎、上呼吸道感染。但该制剂现行质量标准无含量测定项目，为了有效控制药品质量，确保该制剂的疗效，本文，笔者以方中主药金银花的有效成分绿原酸为定量控制指标，采用HPLC法测定银翘解毒丸中绿原酸的含量，方法简便、准确。

一、仪器和试药

日本岛津SPD-20A高效液相色谱仪；德国BP-211D电子分析天平；KQ-250DB超声波清洗器。

绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号110753-200413，供含量测定用）；流动相所用乙腈为北京四友化学试剂厂色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

银翘解毒丸3批（宁夏启元国药有限公司，批号0910081；太极集团重庆桐君阁药厂有限公司，批号090618；吉林市双士药业有限公司，批号20090115）。

二、方法与结果

1.色谱条件色谱柱为Kromasil C18（5μm，4.6mm×250 mm)，流动相为乙腈-0.4%磷酸（10∶90），检测波长327nm，流速1.0m l·min-1，柱温25℃，进样量20μl。

2.溶液的制备与测定。

（1）对照品溶液的制备。取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含40μg的溶液，即得。

（2）供试品溶液的制备。取重量差异项下的本品，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50m l，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，再精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

（3）空白对照溶液的制备。以相同的处方比例，制得不含金银花的空白样品。按（2）项下方法制成空白对照溶液。

（4）测定。分别精密吸取上述3种溶液各20μl，按上述色谱条件分别测定。结果表明，供试品色谱图中呈现与绿原酸对照品保留时间相应的色谱峰，而空白对照无干扰。

3.线性关系考察。精密称取绿原酸对照品3.98mg，置25m l棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密吸取对照品储备液2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取上述溶液5μl，10μl，15μl，20μl，25μl，30μl进样测定，记录峰面积。以浓度（C）对峰面积（A）进行线性回归，得回归方程为A＝-12.99（r=0.999，n=6）。结果表明，绿原酸在0.159～0.955μg·ml-1范围内线性关系良好。

4.精密度实验。精密吸取同一对照品溶液20μl，连续进样5次，分别测得峰面积结果见表1，经过计算得到峰面积平均值为2791，RSD=0.5%。

表1 精密度实验结果

5.稳定性实验。精密吸取上述供试品溶液20μl，于2h、4h、6h、8h、10h后测定峰面积，结果峰面积几乎不变，表明供试品溶液至少在10h内稳定。

6.重复性实验。其结果见表2。精密量取同一样品5份，照2（2）项下操作，测得含量平均值为9.84mg/g，RSD为0.6%（n=5）表明本法重复性好。

表2 重复性实验结果

7.回收率实验。精密称取同一已知含量样品约0.5g共5份，定量加入适量的绿原酸对照品，照2（2）项下操作，并按上述色谱条件测定。结果表明，均回收率为99.8%，RSD为0.7%（n=5）。

8.样品测定。按上述测定方法对3个厂家样品中绿原酸含量进行测定，结果表明，不同厂家的样品中绿原酸的含量差异太大。表明绿原酸含量没有统一的限度标准。

三、讨论

1.取绿原酸对照品进行紫外扫描（200～400nm），结果在327.0nm波长处有最大吸收，实验选择327nm作为检测波长。

2.参照银黄口服液的色谱条件进行检测，其流动相中乙腈的比例不得大于10%，否则样品色谱图的分离效果差。

3.由二、8项可见不同厂家的银翘解毒丸中绿原酸的含量差异太大，而现在对其含量没有统一的限度标准。建议今后在修改标准时应考虑增加含量测定项，以确保药品的质量，保证临床用药安全有效。

4.方法学研究表明，本测定方法操作简单，结果准确，重复性好，空白无干扰，可作为银翘解毒丸质量标准含量测定方法。