姚 南，王 卫，丛 喆，金 光，陶 真，魏 强

(中国医学科学院医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021)

RT-SHIV中国恒河猴适应株细胞水平生物学特性分析

姚 南，王 卫，丛 喆，金 光，陶 真，魏 强

(中国医学科学院医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021)

目的 体外增值、制备动物感染来源的RT-SHIV病毒中国恒河猴适应株，比较PBMCs和CEMx174两种细胞制备出病毒的差异，同时用TZM-bl、CEMx174、PBMC三种细胞滴定测定病毒 TCID50。方法 用 RT-SHIV病毒静脉感染中国恒河猴，定期采血测定血浆病毒载量，当病毒载量达高峰时采血分离外周血单核淋巴细胞(PBMCs)，与正常恒河猴PBMCs或CEMx174细胞共培养，定期测定培养液中的P24抗原水平，当病毒复制达高峰期时收集培养上清，分装并冻存;测定病毒RNA载量、P24抗原浓度，滴定病毒的TCID50。结果 本研究共制备了78 mL PBMCs来源的RT-SHIV病毒和85 mL CEMx174细胞来源的RT-SHIV病毒。RT基因序列和原始序列的相似度为99%，仅在第254和265位的氨基酸发现突变。RT-SHIV(PBMC)和 RT-SHIV(CEMx174)病毒载量分别为1.641×108copies/mL和 8.375×108copies/mL，P24抗原水平分别为 20.745 ng/mL和 4.28 ng/mL，TZM-bl、CEMx174、PBMC细胞测定病毒的 TCID50分别为3.16×105TCID50/mL和1×104TCID50/mL，5×102TCID50/mL和5×105TCID50/mL，5×102TCID50/mL和5×103TCID50/mL。结论 PBMCs细胞来源制备的病毒较CEMx174制备的病毒具有更高的感染性。

RT-SHIV;TCID50;细胞培养

为了筛选抗艾滋病药物及研究耐药性突变，德国科学家Klaus Uberla等于1995年首次构建了RTSHIV病毒，其主要的构建策略是以SIVmac239为主要框架，将 HIVHBc2中的 RT基因替换进去，构建出包含有 HIV-1 RT基因的 SHIV［1］。美国科学家Kelly Soderberg在 RT-SHIV的基础上将 5’LTR的tRNA-Lys3 PBS区中碱基T定点突变为C，构建出构建出感染能力更强 RT-SHIV/TC［2］。……