赵 宁，恽时锋，王 芳，范志宇，胡 波，刘 涛

(1.江苏省农业科学院兽医研究所，农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏 南京 210014;2.南京军区南京总医院比较医学科，江苏 南京 210002)

家兔支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1的原核表达及其间接ELISA方法的建立

赵 宁1，恽时锋2，王 芳1，范志宇1，胡 波1，刘 涛1

(1.江苏省农业科学院兽医研究所，农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏 南京 210014;2.南京军区南京总医院比较医学科，江苏 南京 210002)

目的 表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica，Bb)DNT蛋白，并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法 参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌dnt基因序列(AB020025)针对其N-端设计了一对特异性引物，PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体 pET-28a(+)载体中，以E.coli BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达，以纯化重组蛋白DNT1作为诊断抗原，通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数，建立检测支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1抗体的ELISA方法。结果 成功克隆了dnt N-端的基因序列，并在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达，经 SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白 DNT1具有良好的抗原性。应用重组蛋白DNT1为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白DNT1抗原的包被浓度为6.25 μg/mL，最适血清稀释度为1∶100。结论 建立的ELISA检测方法，不仅为 Bb抗体检测提供了一种比较实用的血清学检测手段，也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。

兔;支气管败……