金丽华，方明月，张翀，蒋培霞，葛楠，李和平，邢新会，包成玉

1 清华大学化学工程系，北京 100084

2 清华大学工程物理系，北京 100084

常压室温等离子体快速诱变产油酵母的条件及其突变株的特性

金丽华1，方明月1，张翀1，蒋培霞1，葛楠2，李和平2，邢新会1，包成玉2

1 清华大学化学工程系，北京 100084

2 清华大学工程物理系，北京 100084

采用新型常压室温等离子体射流诱变产油酵母，结合快速突变产油酵母操作条件及基于96孔板的高通量筛选手段，获得了一系列增殖速度和产油量发生变化的突变株。在等离子体对菌株致死率为99%的条件下获得的以突变株增殖速度为指标的正突变率达到27.2%。用含酵母粉 (10 g/L)、蛋白胨 (10 g/L) 及葡萄糖 (20 g/L) 的酵母膏胨葡萄糖培养基进行发酵实验表明，筛选得到的高产突变体产油量从对照株的1.87% (W/W) 增加到4.07% (W/W)。

常压室温等离子体，产油酵母，高通量筛选，诱变，油脂

Abstract:To obtain oleaginous yeast mutants with improved lipid production and growth rates, an atmospheric and room temperature plasma (ARTP) jet was used with a 96-well plate for high throughput screening. Mutants with changes in growth rates and lipid contents were obtained. At a lethality rate of 99%, the positive mutation rate of the yeast cells was 27.2% evaluated by the growth rates of the mutants and the comparison with the wild strain. The fermentation in a medium composed of yeastextract (10 g/L), peptone (10 g/L) and D-glucose (20 g/L) resulted in the lipid yield of the mutant (C4) with 4.07% (W/W) compared with that of the wild strain (1.87%).

Keywords:atmospheric and room temperature plasma (ARTP), oleaginous yeast, high throughput screening (HTS),mutation, lipid

当今世界化石燃料的过度消耗造成其储备量日益减少，可再生能源的开发与研究日益重要[1]。利用微生物转化生物质生产生物柴油是解决能源短缺的途径之一。利用微生物生产油脂有以下优点：微生物生产油脂周期短、不受季节和气候的影响、营养简单、易于进行工业化大规模培养等。但是也存在微生物的生产能力低、可用碳源种类有限等问题。获取高增殖速度、高油脂含量的菌株成为微生物生物柴油实现工业化的瓶颈。为了筛选高效的油脂生产菌株，国内外研究小组不断从自然界中筛选优良菌株[2]、优化培养基来提高产量[3-4]，或者尝试利用微波、紫外等物理诱变方法获取高产菌株[5-6]。……