HPLC法测定火麻仁中α-亚麻酸的含量*

2011-09-24夏林波邓仕任

化学工程师 2011年3期

关键词：火麻仁亚麻酸标准偏差

夏林波，邓仕任，郭莹

（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600）

分析测试

HPLC法测定火麻仁中α-亚麻酸的含量*

夏林波，邓仕任，郭莹

（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600）

本文采用HPLC法对中药火麻仁中α-亚麻酸进行了含量测定。确定色谱条件为：色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18（150mm×4.6mm,5μm）；流动相乙腈-水（体积比为80∶20）；流速1.0mL·min-1；检测波长210nm；柱温30℃。在此条件下，α-亚麻酸甲酯与其它组分得到良好的分离，线性范围为10.5～168μg（r=0.9998），平均加样回收率为97.26%（RSD=0.84%）。

火麻仁；α-亚麻酸；高效液相色谱法

Abstract：The method of determination α -linolenic acid in hemp seed by HPLC was established in this thesis.The chromatography was carried out on an Agilent Eclipse XDB-C18column （150mm×4.6mm,5μm）with acetonitrile-water（V∶V=80∶20）as themobile phase at a flow rate of 1.0mL·min-1,The detection wavelength was set at 210nm.α-linolenic acid separated thoroughly from other components on this condition,the calibration curve was linearwithin the range of 10.5～168 μg（r=0.9998）and the average recoverieswere 97.26%（RSD=0.84%）.

Key words：hemp seed;α-linolenic acid;high performance liquid chromatography

火麻仁别名麻子、麻子仁、大麻子，为桑科植物大麻Cannabissativa L．的干燥成熟种仁，是一味亦药亦食的润下药，其性味归经甘、平，主治肠燥便，血虚津亏等症[1]。现代研究表明，火麻仁中油脂含量非常丰富（约占30%），火麻仁油脂对便秘和腹泻有良好的双向治疗作用[2]，因此，建立火麻仁中油脂成分的分析方法对火麻仁的系统研究具有重要意义。文献中关于火麻仁油脂中脂肪酸的化学成分研究多采用GC-MS法[3]，然而该方法对仪器要求较高，考虑到HPLC的通用性和普及性，本文采用柱前衍生化，结合HPLC技术，建立了火麻仁药材中的特征成分－α-亚麻酸的含量测定方法。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Shimadzu LC-10Avp高效液相色谱仪；AR2140电子分析天平（力能）；RE52CS旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ2200型超声波清洗器（舒美），HH-4数显恒温水浴锅（国华）。

α-亚麻酸甲酯对照品（中国药品生物制品检定所）；火麻仁购于河北安国，经辽宁中医药大学鉴定教研室翟延君教授鉴定为桑科植物大麻Cannabis sativa L.的干燥成熟果实；色谱纯甲醇（天津科密欧）；二次重蒸水，其它试剂均为分析纯。

1.2 色谱条件色谱柱：AgilentEclipse XDB-C18（150mm×4.6

mm,5μm）；流动相：乙腈 - 水（80∶20）；检测波长：

210 nm；流速：1.0 mL·min-1，柱温：30℃，进样量

10μL。

1.3 对照品溶液的制备

精密称取α-亚麻酸甲酯对照品105.0mg，转移至10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀即得。（α- 亚麻酸甲酯 10.5mg·mL-1）。

1.4 火麻仁油脂的提取

准确称取火麻仁药材粉末（过40目筛）5.00 g，置具塞锥形瓶中，加入75mL石油醚，冷浸30min后，超声振荡30min，过滤后取滤液。重复上述提取过程3次，滤液合并后减压蒸干溶剂，得火麻仁油脂，收率31.2%。

1.5 火麻仁样品的甲酯化

准确称取火麻仁油脂0.20g，置25mL烧瓶中，加入5%NaOH-CH3OH溶液4mL，60℃水浴回流30min（油滴完全消失），冷却后加入14%BF3-CH3OH甲醇溶液5mL，继续回流2min，继而加入4mL正庚烷回流5min，冷却，加入5mL饱和NaCl溶液振荡后分层，精密吸取上清液1mL，挥干溶剂，残留物用甲醇定容至1mL，微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2 结果与讨论

2.1 线性关系考察

精密吸取对照品溶液 1、4、8、12、16 μL，注入高效液相色谱仪中，按1.2项下色谱条件测定色谱峰面积，以绝对进样量为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，并计算线性回归方程为Y=3.96×105X+1.65×107，r=0.9998。结果表明 α-亚麻酸甲酯在10.5～168μg范围内，其峰面积与进样量有良好的线性关系。

2.2 精密度试验

取同一供试品溶液，按1.2项下色谱条件，连续进样5次，测得α-亚麻酸甲酯峰面积值的相对标准偏差为0.70%，表明仪器精密度良好。

2.3 稳定性试验

取同一新鲜制备的供试品溶液，在 0、2、4、6、8、10 h各进样10μL，测得α-亚麻酸甲酯峰面积的相对标准偏差0.90%，表明α-亚麻酸甲酯在10 h内稳定。

2.4 重复性试验

取同一供试品5份，按1.4项下方法制备5份供试液，分别测定α-亚麻酸甲酯含量，相对标准偏差分别为0.80%，表明方法重复性较好。

2.5 加样回收率试验

取已知含量（α-亚麻酸含量为83.9mg·g-1）的火麻仁粉末5份，各约0.64 g，分别加入α-亚麻酸甲酯对照品溶液（10.5mg·mL-1）5μL，按 1.4、1.5 项制备供试液，求得α-亚麻酸甲酯平均加样回收率为97.26%，相对标准偏差为0.84%。

2.6 样品测定

平行取3份火麻仁药材粉末5 g，按1.4、1.5项分别制成供试品溶液。取供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪测定含量，结果显示该批次火麻仁药材中α-亚麻酸含量为83.9mg·g-1，色谱图显示该峰峰型对称，与相邻峰达到基线分离。具体测定结果见表1，样品色谱图见图1。

表1 α-亚麻酸含量测定结果Tab.1 Determination results for contentofα-linolenic acid

图1 火麻仁供试品溶液高效液相色谱图Fig.1 HPLC of hemp seed sample

3 结论

现代研究证明，多不饱和脂肪酸有明显降低高密度脂蛋白血清胆固醇作用，进而减少高血压、心脏病及中风等疾病的发病率，在食品、药品等领域具有广泛的用途[4]。火麻仁中油脂含量丰富（约占30%），且不饱和脂肪酸（如α-亚麻酸、亚油酸）含量很高，约占油脂总量的85%以上，其油脂被认为是火麻仁润肠通便作用的有效成分，因而建立油脂的成分分析及含量测定方法对火麻仁的质量控制具有重要意义。本文采用HPLC法，建立了火麻仁中亚麻酸含量的测定方法，该法简便、易行、适用范围广，经方法学考察证明准确、可靠、重复性好，可作为火麻仁中α-亚麻酸的质量控制方法。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京:化学工业出版社,2010.74.

［2］张明发,朱自平.火麻仁的消化系统药理研究概述［J］.药学实践杂志,1997,15（5）:267.

［3］张媛,王之.火麻仁脂溶性成分的GC-MS分析［J］.西北植物学报,2006,26（9）:195.

［4］郑子新,张荣欣.构成脂肪的脂肪酸和必需脂肪酸（营养与健康卷）［M］.成都:四川人民出版社,1999.50.

Determ ination ofα-linolenic acid in hem p seed by HPLC*

XIA Lin-bo,DENG Shi-ren,GUO Ying

（College of Pharmacy,Liaoning University of Tradional Chinese Medicine,Dalian 116600,China）

O657.7 TS225.1

1002-1124（2011）03-0017-03

2010-12-22

辽宁省教育厅科学技术研究项目（No.2008450）；辽宁中医药大学优秀青年药学人才基金（yxrc0912）

夏林波（1977-），女，讲师，博士，主要研究方向：中药分析。