李炫丽，王世才，许双全

（湖北省种子集团有限公司禾盛生物育种研究院，武汉 430070）

水稻单粒种子DNA提取及SSR-PCR反应体系的正交设计优化

李炫丽，王世才，许双全

（湖北省种子集团有限公司禾盛生物育种研究院，武汉 430070）

本文以水稻单粒干种子为材料进行DNA提取方法和SSR-PCR反应体系的优化研究，结果表明：用CTAB法提取的水稻干种子DNA较为完整，降解量少，可获得理想的扩增效果。在试验设计范围内，确定的最佳反应体系为20 μL，其中含模板DNA 45ng，dNTPs浓度为0.15 mmol/L，引物浓度为0.4 μmol/L，Mg2+浓度为1.5 mmol/L，Taq酶为1.6 U。

水稻；种子；CTAB法；SDS法；SSR-PCR体系优化

我国是世界上第一个在生产上利用水稻杂种优势的国家，杂交水稻的推广对大幅度提高水稻单产起了巨大作用。但是，由于种子质量问题给农户造成严重减产的事件时有发生。因此，种子质量（主要是真实性和纯度）控制显得尤为重要。如何能更快更有效地鉴定和检验杂交水稻种子纯度和品种真实性，已成为种子生产和销售中亟待解决的问题之一。

SSR（Simple Sequence Repeats）标记是指以 2 ～ 6个碱基为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列，广泛分布于水稻基因组中。由于SSR分子标记具有分布广泛、共显性遗传、结果稳定性高等优点，在指纹图谱构建、遗传多样性分析等方面有着广泛的应用[1]，在生产指导中常用于杂交水稻品种真实性和纯度鉴定。

在杂交水稻纯度鉴定和真实性鉴定过程中，大多数工作人员常选取幼小植株或幼嫩叶片为材料进行植物基因组提取，这种方法不仅费时（种子发芽一般需要4～6天），且步骤繁琐，很难适应如今种子贸易的快节奏。……