刘坤，姚阳

(沈阳医学院基础医学院生理学教研室，辽宁 沈阳 110034)

脑出血 (intracerebral hemorrhage，ICH)后脑水肿是ICH患者病情恶化和死亡的主要原因，凝血酶 (thrombin，TH)在ICH后脑水肿的形成中发挥重要作用。水蛭素是特异性的TH抑制剂，能与TH快速结合使其丧失活性［1］，因而具有减轻水肿的作用，但其具体机制尚不清楚。研究表明，TH与 ICH后的血脑屏障 (blood brain barrier，BBB)破坏有关，紧密连接相关蛋白claudin－5的表达与BBB的通透性改变密切相关。我们的研究旨在证明水蛭素是否可以通过调节claudin－5的表达，进而改变BBB通透性而减轻ICH后脑水肿的程度。

1 材料和方法

1.1 材料 健康雄性Wistar大鼠60只，体重260～300 g，沈阳医学院实验动物中心提供;戊巴比妥钠 (Sigma，美国);小鼠抗claudin－5单克隆抗体(Santa Cruz公司);山羊抗小鼠辣根过氧化物酶标记的IgG二抗 (北京中山生物技术公司)，伊文思蓝 (Evans blue，EB，Fluka公司进口分装)，水蛭素 (上海太阳生物有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 分组 健康Wistar大鼠随机分为对照组、ICH组、水蛭素组。各组大鼠于术后48h取脑组织分别检测BBB通透性及claudin－5蛋白表达情况。各时间点均取20只大鼠分别进行各项检测。

1.2.2 动物模型制作 参照Rosenberg等的方法进行。大鼠经水合氯醛麻醉后，固定于立体定位仪上，行头部正中纵行切口，剥离骨膜暴露前囟和冠状缝。于前囟前0.2 mm，中线向右旁开3.0 mm处钻一直径1.0 mm小孔。ICH组大鼠用微量注射器从股动脉抽取适量血，在立体定向仪引导下经钻孔垂直进针，深度约6.0 mm(相当于右侧尾状核)，缓慢注血75 μl，留针10 min后退针并再注入3 μl生理盐水;水蛭素组注血75 μl后再注入含15 U水蛭素的生理盐水3 μl;对照组仅注入78 μl生理盐水。……