周浩 黄鑫 吴秀兰 蒋波 吴俗

苏氨酸是一种重要的营养强化剂，有恢复人体疲劳，促进生长发育，保护细胞膜，促进磷脂合成和脂肪酸氧化，抗脂肪肝药用效能，是复合氨基酸输液中的一种，同时又是制造高效低过敏的抗生素单酰胺菌素的原料，苏氨酸中常见杂质为脯氨酸，中国药典2010版中使用TLC法[1]，对杂质脯氨酸进行限量，但无法定量，本文建立苏氨酸中脯氨酸的定量方法，经验证，专属性好，灵敏度高，重复性好，准确度高。

1 仪器与试药

WATERS e2695泵;Alltech蒸发光散射检测器2000ES;苏氨酸(正大天晴，批号:1001011、1001012、1001021);脯氨酸对照品(AR，进口分装，批号100328，惠兴生化试剂)。

2 方法与结果

2.1 专用溶剂 25%乙腈水溶液

2.2 供试品溶液 取苏氨酸50 mg，精密称定，置10 ml量瓶中，加专用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 对照品溶液 取脯氨酸对照品适量，精密称定，加专用溶剂溶解并稀释并制成每1 ml分别含10、20、30、40和50 μg的溶液，即得。

2.4 色谱条件 色谱柱Sepax HP-Silica(250 mm×4.6 mm，5 μm)，40℃;流动相水-异丙醇-正己烷-冰醋酸-三乙胺(200∶750∶50∶6∶0.6)，1.0 ml/min，蒸发光检测器(载气 2 L/min，漂移管 95℃)。

2.5 专属性 配制含苏氨酸5 mg/ml和脯氨酸20 μg/ml的混合溶液，进样，结果脯氨酸和苏氨酸有效分离，专用溶剂无干扰(见图1)。

图1 混合溶液色谱图(下)和专用溶剂色谱图(上)

2.6 线性关系 精密量取各对照品溶液20 μl，分别检测，结果脯氨酸浓度在10～50 μg/ml范围内的浓度对数值(X)与峰响应值对数值(Y)呈显著线性关系，线性方程 Y=1.5224X+7.2756，r=0.9981。

2.7 系统精密度 精密量取对照品溶液(20 μg/ml)20 μl，连续测定6次，结果RSD=1.8%，表明系统精密度良好。

2.8 定量限及检测限 取对照品溶液(10 μg/ml)，逐级稀释，分别测定，当信噪比约10∶1和3∶1时，分别计算定量限和检测限，结果脯氨酸的定量限为5 μg/ml，检测限为2 μg/ml。……