王伟斌

随着高龄人口和脑卒中存活率的增高，血管性痴呆(VD)的发病愈来愈多。由于生理浓度的钙离子作为神经细胞内第二信使，参与了学习和记忆过程;因此，神经细胞［Ca2+］i研究一直倍受人们关注。

1 材料与方法

1.1 动物模型制备与分组 实验动物选用2月龄雄性昆明小鼠。采用双侧颈总动脉结扎再灌注的方式制备VD模型;假手术组仅暴露双侧颈总动脉;治疗组先制备模型，术后第2天给予石杉碱甲0.05 μg/g/d 30 d。

1.2 学习、记忆成绩测试 跳台试验装置为被动回避反应箱，术后第29天测试学习成绩，记录动物反应时间、错误次数;24 h后测试记忆成绩(潜伏时间及错误次数)。

1.3 LSCM下观察神经细胞静息态［Ca2+］i及其去极化兴奋时的钙震荡 将小鼠断头处死，在低温下分离出海马组织，制备海马活细胞。滴加荧光探针Fluo-3(浓度1000 mM)1 μl，在Bio-Rad MRC-1024型LSCM下，对锥体细胞进行激光扫描观察，数据为细胞内荧光像素的相对值;观察静息态［Ca2+］i后，加入20 μl 50 mmol/L氯化钾溶液，观察神经细胞的钙震荡变化，记录其［Ca2+］i的上升时间、下降时间以及升高的峰值和幅度。

1.4 数据分析 采用单因素方差分析，运用SAS软件进行处理，并采用SNK法进行3组之间的两两比较。

2 结果

2.1 跳台试验 表1可见，模型组的学习成绩和记忆成绩均劣于假手术组，治疗组的学习成绩和记忆成绩均优于模型组。

2.2 海马神经细胞钙稳态变化 表2可见，模型组静息态［Ca2+］i显著高于假手术组、治疗组，并且去极化后海马神经细胞［Ca2+］i升高幅度明显降低，恢复时间明显延长。

表1 各组小鼠学习和记忆成绩比较