冯 卫,付 莉,李冬松,刘建国*

(1.吉林大学白求恩第一医院,吉林长春 130021;2.吉林大学白求恩第二医院）

纳米羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HAP）作为一种新型生物医用材料,正在成为骨组织工程研究的热点,用于骨缺损的治疗研究。研究表明纳米羟基磷灰石可以作为药物载体,先前研究表明纳米羟基磷灰石对正常细胞没有抑制作用[1],而体外实验可以抑制胃癌、喉癌肿瘤细胞[2,3]。但是对骨肉瘤的作用还不十分清楚,本研究的目的是观察纳米羟基磷灰石粒子对骨肉瘤细胞MG63的作用,探讨其抑制肿瘤细胞的作用机理。

1 材料与方法

1.1 材料羟基磷灰石纳米粒子由四川大学分析测试中心提供,长径为60-80 nm,直径为10-20 nm。骨肉瘤细胞MG63细胞株由四川大学华西移植免疫实验室提供。RPMI1640培养基(Gibco公司）,小牛血清(HyClone公司）,丫啶橙(AO）、溴化已啶(EB）及胰蛋白酶均购自Sigma公司。

1.2 MG63细胞培养MG 63细胞培养于含10%小牛血清的 RPMI1640培养液中,37℃、5%CO2、饱和湿度下培养,隔日换液,每4天按1∶3比例传代。

1.3 MTT法检测不同浓度HAP纳米粒子对MG63生长的抑制率分别将HAP纳米粒子用培养液配制成10、20、50、100、150、200、250、300、350、400mg/L 10种浓度。将MG63细胞按1×103/孔接种于96孔板中,每孔加入培养基180μ l,于 37℃、5%CO2 下培养24 h后仔细吸出孔内培养液,分别加入上述不同浓度的HAP纳米粒子,对照组加入等量培养液,每浓度重复4孔。48 h后进行MTT法检测,酶标仪检测各孔OD值(λ=492 nm）,记录结果,计算每种HAP浓度对细胞的抑制率。并计算30%抑制浓度(30%Inhibiting concentration,IC30）,50%抑制浓度(IC50）和70%抑制浓度(IC70）。抑制率=100%×(试验组OD值-对照组OD值）/对照组OD值

1.4 IC30、IC50、IC70浓度HAP对MG63生长抑制作用的时效曲线 将MG 63细胞接种于96孔板中,每孔接种1×103个细胞,24 h后随机分为IC30组、IC50组、IC70组和空白对照组,每组24孔。……