何忠梅,张显涛,王铁成

(1.吉林农业大学,吉林长春 130118;2.修正药业集团长春高新制药有限公司;3.吉林天药科技有限公司）

薯蓣皂苷元(Diosgenin,Dio）是从我国特有的薯蓣科植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponicaMakino中分离得到的一种植物甾体化合物,具有降血脂[1]、降血糖[2]、促进胆汁分泌[3]、抗血栓[4]、抗心肌缺血[5]、抗风湿[6]、抗炎[7]等作用,而它的抗肿瘤作用[8-10]更是引起了研究者的极大关注。Dio能够诱导人红白血病细胞和人白血病细胞分化和凋亡[11],诱导人骨肉瘤细胞凋亡和人黑色素瘤细胞凋亡[12],具有明显抑制移植胃低分化粘液腺癌(MGC-803）荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用[13],Dio还能明显抑制MGC-803细胞的分裂和集落形成[14],能引起其形态改变并影响其DNA的合成[15],而关于Dio是否能诱导MGC-803细胞凋亡及其凋亡途径的研究,至今尚未见报道。本实验主要在离体条件下,探讨Dio对MGC-803细胞的促凋亡作用及caspase-3对凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料、仪器与试剂

MGC-803细胞株购自吉林省肿瘤医院。CK2TRC-3荧光倒置显微镜(OLYMPUS公司）;D-63450-CO2培养箱(Hera公司）;FCANF129004酶标仪(TECAN公司）;流式细胞仪(BD公司）;96孔培养板和培养瓶(NUNCTM）;RPMI-1640培养基(Hyclone）;新生牛血清(北京元亨圣马生物技术研究所）;Annexin V-FITC和APO-BRDU细胞凋亡检测试剂盒、四唑蓝(MTT）、Ac-DEVD-CHO和 A-DEVD-AFC均为Sigma公司产品。Diosgenin亦为Sigma公司产品,用无水乙醇和二甲基亚砜配制成高浓度溶液备用,二者的终浓度均低于0.1%。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养 按常规方法培养传代,取对数生长期细胞用于实验。

1.2.2 细胞生长抑制实验 以每孔1×104个细胞的密度接种于96孔板中,培养12 h后加入diosgenin浓度分别为 0,1.875,3.75,7.5,15,30,60 μ g◦ml-1,分别于0,24,48,72 h用MTT方法测定细胞死亡率。……